【病原微生物檢測】

時間：2021-04-08作者：廣東省華微檢測股份有限公司瀏覽：99

1 傳統(tǒng)的病原微生物的檢測方法

傳統(tǒng)的病原微生物學(xué)實驗室檢查以染色、培養(yǎng)、生化鑒定等為主，將標(biāo)本直接涂片染色鏡檢和接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)是對細(xì)菌或真菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)診斷的常用方法。

1．1 直接涂片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無色半透明狀，將其染色后可借助顯微鏡觀察其大小、形態(tài)、排列等。直接涂片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形態(tài)的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結(jié)核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接涂片鏡檢不需要特殊的儀器和設(shè)備，在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。

1．2 分離培養(yǎng)與生化反應(yīng)分離培養(yǎng)主要用于臨床標(biāo)本(如血液、痰、糞便等)或培養(yǎng)物中有多種細(xì)菌時對某一種細(xì)菌的分離。細(xì)菌的生長繁殖需要一定時間，檢測周期較長，不能同時處理批量樣本。為解決這一問題，各種自動化培養(yǎng)和鑒定系統(tǒng)不斷產(chǎn)生，傳統(tǒng)鑒定方法也在逐步改進(jìn)，大大加快了檢驗速度。養(yǎng)菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養(yǎng)要求比較高，常規(guī)培養(yǎng)陽性率低。將不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養(yǎng)基中制成了新型淋病奈瑟菌培養(yǎng)基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養(yǎng)率。

1．3 組織細(xì)胞培養(yǎng)活組織細(xì)胞培養(yǎng)適于專營活組織細(xì)胞內(nèi)生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細(xì)胞是不一樣的，將活細(xì)胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進(jìn)行原代培養(yǎng)或用病原體敏感細(xì)胞系進(jìn)行傳代培養(yǎng)，再將病原體接種于相應(yīng)的組織細(xì)胞中后，病原體可在其中繁殖增長，引起特異性的細(xì)胞病變效應(yīng)。也可以將病原體直接接種于敏感動物體內(nèi)，引起相應(yīng)組織器官出現(xiàn)特異的病理學(xué)改變。往往可以根據(jù)這些特異的病變對病原體進(jìn)行鑒定。

2 血清學(xué)與學(xué)檢測

血清學(xué)檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進(jìn)行快速鑒定的技術(shù)，簡化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術(shù)、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術(shù)、協(xié)同凝集試驗、酶聯(lián)測試技術(shù)等。酶聯(lián)技術(shù)的應(yīng)用大大提高了血清學(xué)檢測的敏感性和特異性，不僅可檢測樣本中病原體抗原，也可檢測機體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達(dá)50％ ～80％ ，應(yīng)用酶聯(lián)吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染，其結(jié)果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率較高，ELISA應(yīng)用于乙型肝炎病人早期血清學(xué)診斷的效果為明顯。

臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細(xì)菌中分離出目標(biāo)菌是關(guān)鍵。磁珠分離技術(shù)(IMBS)是近年來發(fā)展起來的在微生物檢測領(lǐng)域中一種新技術(shù)。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯(lián)到磁珠微球上，通過抗原抗體反應(yīng)形成磁珠一目標(biāo)病原體復(fù)合物或磁珠一一抗一目標(biāo)病原體復(fù)合物，在外部磁場磁力的作用下，將目標(biāo)病原體分離出來。目前已經(jīng)開發(fā)出了針對各種病原體的磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團(tuán)菌等，廣泛應(yīng)用到各級科研和實驗室 。經(jīng)IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測，檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術(shù)聯(lián)合來檢測病原菌，磁珠分離得到的目標(biāo)菌可繼續(xù)用于分離培養(yǎng)使大腸埃希菌0157低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)(IMBS—PCR)可對培養(yǎng)條件比較特殊的細(xì)菌如苛養(yǎng)菌、厭氧菌進(jìn)行快速檢測，肉類中的產(chǎn)毒素型產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)IMBS．PCR檢測，檢測時間縮短到10 h，低檢測限可達(dá)10cfu·g～，有研究者利用IMBS結(jié)合實時熒光定量PCR(IMBS—RT—PCR)成功檢測出了水中的輪狀病毒和草莓的諾如病毒，檢測時間大大縮短；Leon—Velarde等利用IMB8結(jié)合酶聯(lián)檢測，大大提高了沙門菌的檢測效率。

3 基因檢測

隨著科技水平發(fā)展，分子生物學(xué)檢測技術(shù)日新月異，對病原微生物的鑒定已不再局限于對普通外部形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理生化特性等的一般檢驗上，而是深入到了分子水平、核酸水平。病原微生物的核酸序列即基因片段都是特異的，有別于其他種或?qū)伲瑱z測其特有的基因片段序列可用來鑒別病原微生物。隨著科技的發(fā)展，基因檢測技術(shù)逐漸代替其它檢測技術(shù)，成為臨床檢驗科和基礎(chǔ)實驗室對病原體的主流檢測技術(shù)。





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