【病毒抑制率實驗】

時間：2021-04-08作者：廣東省華微檢測股份有限公司瀏覽：151

構(gòu)建方法

一般是根據(jù)原始質(zhì)粒信息確定克隆方案，有以下兩種方法。

1）如果原始質(zhì)粒與載體有匹配酶切位點，采用相應(yīng)的內(nèi)切酶切下相應(yīng)片段，回收并連接到載體，酶切，并測序鑒定。

2）如果沒有匹配的酶切位點，則設(shè)計帶有特殊接頭的引物進行PCR擴增，得到目的片段，采用相應(yīng)的內(nèi)切酶切下相應(yīng)片段，回收并連接到穿梭載體，酶切，并測序鑒定。

質(zhì)粒載體

能夠進行自主復制的環(huán)狀DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子。

質(zhì)粒載體特征

質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome)，這類質(zhì)粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細胞體內(nèi)外都可復制。通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，利用選擇培養(yǎng)基來篩選從而不斷的復制，來得到目的產(chǎn)物。

構(gòu)建目的基因載體

該病毒包裝系統(tǒng)為三質(zhì)粒系統(tǒng)，組成為pspax2, pMD2G, pLVX-IRES-ZsGreen1/pLVX-shRNA2。其中質(zhì)粒上的ZsGreen1表達框能表達綠色熒光蛋白（GFP）。


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