原代細胞培養(yǎng)——百歐博偉生物

    原代細胞培養(yǎng)——百歐博偉生物
    原代細胞培養(yǎng)是指細胞分離之后至初次傳代之前的細胞培養(yǎng)階段。
    原代細胞培養(yǎng)四個階段:1.獲取樣品 2.分離組織3.解剖或解離組織塊4.接種于培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)
    原代細胞培養(yǎng)種類:
    1. 將組織塊貼附于適宜的基質中,細胞可自組織塊向外遷移生長。
    2. 將組織塊用機械法或酶消化法處理后獲得細胞懸液,接種細胞懸液,其中部分細胞黏附于基質生長。
    酶的種類:胰蛋白酶
              膠原酶
              彈性蛋白酶
              鏈酶蛋白酶
              裂解酶
              脫氧核糖核酸酶
              透明質酸酶
    這些酶即可單獨使用,又可聯(lián)合應用。
    原代細胞培養(yǎng)共同需要的條件:
    在取材時需去除脂肪和壞死組織;
    為減少對組織的損傷,需用鋒利的器具;
    適度離心以去除用于解離的酶;
    由于原代培養(yǎng)組織細胞的存活率很低,原代培養(yǎng)的細胞密度應**正常傳代培養(yǎng)的細胞密度;
    營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基如Ham’s F12比簡單的培養(yǎng)基(Eagle’s MEM)較可取。如添加血清,胎牛血清比?;蝰R的血清較好,細胞成活率較高。特殊細胞類型的分離可能需要選擇性培養(yǎng)基。
    與成體組織相比,原代培養(yǎng)時用胚胎組織較易分離,細胞較易存活,增殖速度較快。
    組織分離:對人或動物組織處理之前,請確認你的工作符合醫(yī)學倫理學規(guī)則和現(xiàn)行的動物實驗法規(guī)。對人體活檢或胚胎組織進行研究時獲得本地倫理**、病人及其親屬的同意。
    若取材部位容易被污染(如皮膚)應先用75%乙醇消毒,在無菌條件下切除組織,放在取材用轉運培養(yǎng)基中,盡快轉移至培養(yǎng)室。若只能延遲轉移,可于4 ℃保存,不**過72h,但是轉移越快存活率越高。
    取材的基本要求:
    速度要快,新鮮組織2h內(nèi)送到實驗室;
    常溫或者4度保存運輸,切勿凍存;
    嚴格無菌環(huán)境:所用離心管和試劑等均為無菌級,密封良好;
    保存方式:液體樣本采用無菌離心管(血液用抗凝管);組織樣本放入盛有2%雙抗的PBS溶液的無菌離心管中,管口用封口膜封緊。
    分離組織并進行原代培養(yǎng),是特殊功能細胞培養(yǎng)的也是一個重要的階段。
    不同種類的細胞原代培養(yǎng)應采用相應的技術方法,選擇好的途徑,參考以前的相關工作文獻。
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