細(xì)菌生長曲線測定

    細(xì)菌生長曲線測定

    細(xì)菌生長曲線(Bacterial growth curve)是專指單細(xì)胞微生物的。它是將少量的單細(xì)胞微生物接種純種到一定容積的液體培養(yǎng)基后,在適宜的條件下培養(yǎng),定時取樣測定細(xì)胞數(shù)量。以細(xì)胞增長數(shù)目的對數(shù)做縱坐標(biāo),以培養(yǎng)時間做橫坐標(biāo),繪制一條如圖所示的曲線,我們稱這條曲線為細(xì)菌的生長曲線。

    測定步驟

    (1)菌液培養(yǎng): 在菌株的斜面培養(yǎng)物上挑取一環(huán)菌苔,接種千肉湯培養(yǎng)基中, 3TC靜止培養(yǎng)12h 左右,此菌液即為種子培養(yǎng)液。

    (2)分裝培養(yǎng)液及校正零點(diǎn):用無菌移液管吸取25mL 培養(yǎng)基加至有側(cè)臂試管的三角燒瓶中。將未接種的培養(yǎng)液傾入其側(cè)臂試管中,并在光電比色計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn)。即使光電比色計(jì)上的OD 值在零點(diǎn)上。

    (3)接種及零時測定:用移液吸管吸取2. SmL 種子培養(yǎng)液接種瓶中,并充分搖勻。將剛接種的培養(yǎng)液傾入側(cè)臂試管中,測定光電比色計(jì)OD 值。此時的讀數(shù)為接種后菌種生長曲線中的零時讀數(shù)值( 即接種拭)。

    (4)培養(yǎng)及生長量測定將零時測定后的三角燒瓶立即放人恒溫水浴搖床上震蕩培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為3TC, 搖床的頻率為100 次/min 左右(溫度和頻率可隨時調(diào)節(jié)) 。在培養(yǎng)中,應(yīng)每隔30min 從搖床上取下三角燒瓶,將菌液傾入側(cè)臂試管中, 并在光電比色計(jì)上讀取OD 值。記錄每次所測得的數(shù)據(jù)。在每次測定時,均要用空白對照管的培養(yǎng)液來校正光電比色計(jì)的零點(diǎn)。

    (5)繪制生長曲線: 以測定的時間為橫坐標(biāo),菌數(shù)的對數(shù)(OD 值)為縱坐標(biāo), 在半對數(shù)坐標(biāo)紙上描點(diǎn)繪圖,所得的曲線即為被測蔭在實(shí)驗(yàn)條件下的生長曲線。

     


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