化妝品祛斑美白功效測試方法

時間：2021-03-03作者：北京天健華成國際貿(mào)易咨詢有限公司瀏覽：251

化妝品祛斑美白功效測試方法

Test Method for Efficacy Measurement of SkinWhitening Cosmetic Products

**法紫外線誘導(dǎo)人體皮膚黑化模型祛斑美白功效測試法

1 范圍

本方法規(guī)定了通過紫外線誘導(dǎo)人體皮膚黑化模型對化妝品祛斑美白功效的測試方法。

2 定義

2.1 較小紅斑量（Minimal erythema dose，MED）：引起皮膚清晰可見的紅斑，其范圍達(dá)到照射點(diǎn)大部分區(qū)域所需要的紫外線照射較低劑量（J/m2）或較短時間（s）。

2.2 個體類型角（individual type angle，ITA°）：通過皮膚色度計或反射分光光度計測量皮膚L*a*b*顏色空間數(shù)據(jù)來表征人體皮膚顏色的參數(shù)，計算公式如下：

2.3 黑素指數(shù)（melanin index，MI）：通過測定皮膚表面對特定波長光譜的吸收來表征皮膚中黑素含量的參數(shù)。

3 試驗(yàn)方法

3.1 受試者的選擇

按入選和排除標(biāo)準(zhǔn)選擇合格的受試者，確保各測試區(qū)較終完成有效例數(shù)均不**30人。

3.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)

3.1.1.1 18~60歲，健康男性或女性；

3.1.1.2 測試部位膚色I(xiàn)TA°值在20°~41°者；

3.1.1.3 無過敏性疾病，無化妝品或其它外用制劑過敏史；

3.1.1.4 既往無光感性疾病史，近期內(nèi)未使用影響光感性的藥物；

3.1.1.5 受試部位的皮膚應(yīng)無色素沉著、炎癥、瘢痕、色素痣、多毛等現(xiàn)象；

3.1.1.6 能夠接受測試區(qū)域皮膚使用人工光源進(jìn)行曬黑者；

3.1.1.7 能理解測試過程，自愿參加試驗(yàn)并簽署書面知情同意書者。

3.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

3.1.2.1 妊娠或哺乳期婦女，或近期有備孕計劃者；

3.1.2.2 有銀屑病、濕疹、異位性皮炎、嚴(yán)重痤瘡等皮膚病史者；

3.1.2.3 近1個月內(nèi)口服或外用過皮質(zhì)類固醇激素等抗炎藥物者；

3.1.2.4 近2個月內(nèi)口服或外用過任何影響皮膚顏色的產(chǎn)品或藥物（如氫醌類制劑）者；

3.1.2.5 近3個月內(nèi)參加過同類試驗(yàn)或3個月前參加過同類試驗(yàn)，但試驗(yàn)部位皮膚黑化印跡沒有完全褪去者；

3.1.2.6 近2個月內(nèi)參加過其他臨床試驗(yàn)者；

3.1.2.7 其他臨床評估認(rèn)為不適合參加試驗(yàn)者。

3.2 受試物

3.2.1 試驗(yàn)產(chǎn)品：祛斑美白化妝品。

3.2.2 陰性對照：黑化區(qū)空白對照。

3.2.3 陽性對照：按附錄I配方配制的7%抗壞血酸（維生素C）制品（4℃冷藏、鋁管避光保存）。

3.2.4 受試物涂抹

由工作人員按照隨機(jī)表對應(yīng)測試區(qū)進(jìn)行受試物的涂抹，涂樣面積應(yīng)不小于6cm2，涂樣量為2.00±0.05mg/cm2。每個測試區(qū)之間的間隔應(yīng)不小于1.0cm。產(chǎn)品使用頻率應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品使用說明，如需每天多次涂抹，每次涂抹間隔時間不小于4小時。

3.3 試驗(yàn)部位：**選擇背部作為試驗(yàn)部位，也可選擇大腿、上臂等非曝光部位。每個黑化測試區(qū)面積應(yīng)不小于0.5cm2，并應(yīng)位于每個涂樣區(qū)域內(nèi)。

3.4 試驗(yàn)儀器

3.4.1 日光模擬儀：采用具有連續(xù)性光譜輻射、能夠產(chǎn)生UVA+UVB波長紫外線的氙弧燈日光模擬儀。290nm以下的波長應(yīng)用適當(dāng)?shù)倪^濾系統(tǒng)去除，輸出波譜需經(jīng)過計量檢定或校準(zhǔn)。

3.4.2 皮膚色度儀：具有可以測量國際照明**（CIE）制定的L*a*b*顏色空間數(shù)據(jù)的儀器。

3.4.3 皮膚黑素檢測儀：具有基于光譜吸收的原理檢測皮膚MI值的儀器。

3.5 環(huán)境條件

試驗(yàn)過程中視覺評估、儀器測試環(huán)節(jié)都應(yīng)在溫度為21±1℃、相對濕度為50±10% RH的環(huán)境下進(jìn)行，視覺評估還應(yīng)在恒定光照（色溫5500~6500K的日光燈管或LED光照）條件下進(jìn)行，受試者需在此環(huán)境條件下適應(yīng)至少30分鐘后方可進(jìn)行評估和測試。

3.6 試驗(yàn)流程

3.6.1 按照要求招募入組志愿受試者，簽署書面知情同意書。入組前根據(jù)入選和排除標(biāo)準(zhǔn)等詢問受試者一系列關(guān)于疾病史、健康狀況等問題，同時對受試部位皮膚進(jìn)行符合性評估和膚色測試篩選，并記錄。

3.6.2 合格受試者進(jìn)入建立人體皮膚黑化模型階段。首先應(yīng)確定每位受試者試驗(yàn)部位的MED。然后在試驗(yàn)部位選定各測試區(qū)，用日光模擬儀在相同照射點(diǎn)按0.75 倍MED劑量每天照射1次，連續(xù)照射4天。

3.6.3 照射結(jié)束后的4天為皮膚黑化期，不作任何處理。

3.6.4 照射結(jié)束后第5天，對各測試區(qū)皮膚顏色進(jìn)行視覺評估和膚色儀器檢測，應(yīng)剔除一致性差的測試區(qū)（ITA°值與全部測試區(qū)均值相差大于5的區(qū)域）。當(dāng)天開始在各黑化測試區(qū)根據(jù)隨機(jī)表涂抹相應(yīng)受試物。

3.6.5 連續(xù)涂抹受試物至少4周，在涂抹后1周、2周、3周和4周應(yīng)對皮膚顏色進(jìn)行視覺評估和儀器檢測，并記錄。

3.6.5.1 視覺評估

由皮膚科醫(yī)生借助由淺至深膚色的色卡對各測試區(qū)膚色進(jìn)行分別評估，并及時記錄評分。

3.6.5.2 皮膚色度儀測量

在各個訪視時點(diǎn)，用皮膚色度儀分別測量各測試區(qū)域的L*、 a*、 b* 值，每個區(qū)域測試三次，記錄并計算ITA°值，ITA°值越大，膚色越淺，反之膚色越深。

3.6.5.3 皮膚黑素檢測儀測量

在各訪視時點(diǎn)，用皮膚黑素檢測儀分別測量各測試區(qū)域的MI值，每個測試區(qū)測試三次，并記錄；MI值越小，表示皮膚黑素含量越低，反之皮膚黑素含量越高。

3.7 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。計量資料表示為：均值±標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布要求，自身前后的比較采用配對t檢驗(yàn)，否則采用兩個相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)；等級資料使用前后的比較，采用兩個相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)；測試區(qū)和對照區(qū)之間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；同時，計算各參數(shù)隨時間變化的回歸系數(shù)（斜率k值），顯著性水平均為P<0.05。

3.8 試驗(yàn)結(jié)論

試驗(yàn)產(chǎn)品涂抹前后任一時間點(diǎn)膚色視覺評分差值或ITA°差值與陰性對照相比有顯著改善（P<0.05），或經(jīng)回歸系數(shù)分析整體判斷試驗(yàn)產(chǎn)品與陰性對照相比皮膚黑化顯著改善時（P<0.05），則認(rèn)定試驗(yàn)產(chǎn)品具有祛斑美白功效性，否則認(rèn)為試驗(yàn)產(chǎn)品無祛斑美白功效。

4 檢驗(yàn)報告

檢驗(yàn)報告應(yīng)包括下列內(nèi)容：樣品編號、名稱、生產(chǎn)批號、生產(chǎn)及送檢單位、樣品物態(tài)描述以及檢驗(yàn)起止時間等，檢驗(yàn)項(xiàng)目、材料和方法、檢驗(yàn)結(jié)果、結(jié)論。檢驗(yàn)報告應(yīng)有授權(quán)簽字人簽字，歸檔報告應(yīng)有檢驗(yàn)人、校核人和授權(quán)簽字人分別簽字，均需加蓋試驗(yàn)機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)檢測**章或公章。其中檢驗(yàn)結(jié)果以表格形式給出，如下表1~2：

表1 試驗(yàn)產(chǎn)品及對照檢測結(jié)果

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注：計量資料數(shù)據(jù)結(jié)果表

表2 試驗(yàn)產(chǎn)品及對照檢測結(jié)果

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注：等級資料數(shù)據(jù)結(jié)果表

附錄I 7%抗壞血酸（維生素C）陽性對照物的制備方法

1. 在紫外線誘導(dǎo)人體皮膚黑化模型祛斑美白功效試驗(yàn)中，應(yīng)同時測定按表3配方制備的陽性對照物，作為試驗(yàn)質(zhì)量控制參考。

2. 陽性對照為7%抗壞血酸（維生素C）制品。

3. 陽性對照物的配方和制備方法見下表3：

表3 7%抗壞血酸（維生素C）的制備

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注：1.制備方法：將A1和B2分別加熱至65~70°C，直至完全溶解，然后冷卻至室溫；再將A2加入到A1中，攪拌均勻（混合物pH值需在6.0左右）；將B1加入到B2中，室溫下以2000~2500rpm的轉(zhuǎn)速攪拌5分鐘進(jìn)行均質(zhì)。A、B相分別均質(zhì)好后，以3000~4000rpm將A相加入到B相中，再以8000rpm攪拌5分鐘進(jìn)行乳化。乳化完成后，室溫條件下加入C相，然后以8000~10000rpm攪拌10分鐘進(jìn)行均質(zhì)，完成。

2. 將配制物分裝到鋁管中，4°C保存，保質(zhì)期為6個月。

3. 本配方制備物**于試驗(yàn)用途，不能用作商業(yè)目的。

*二法人體開放使用祛斑美白功效測試法

1 范圍

本方法規(guī)定了對化妝品祛斑美白功效的人體開放使用試驗(yàn)的測試方法。

2 定義

2.1 個體類型角（individual type angle，ITA°）：通過皮膚色度計或反射分光光度計測量皮膚L*a*b*顏色空間數(shù)據(jù)來表征人體皮膚顏色的參數(shù)，計算公式如下：

2.2 黑素指數(shù)（melanin index，MI）：通過測定皮膚表面對特定波長光譜的吸收來表征皮膚中黑素含量的參數(shù)。

3 試驗(yàn)方法

3.1 受試者的選擇

按受試者入選和排除標(biāo)準(zhǔn)選擇合格的受試者，并按隨機(jī)表分為試驗(yàn)組和對照組，在受試部位左右兩側(cè)色斑對稱的情況下，可分為試驗(yàn)產(chǎn)品側(cè)和對照產(chǎn)品側(cè)，確保較終完成有效例數(shù)不少于30人/組（側(cè)）。

3.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)

3.1.1.1 18~60歲，健康女性或男性；

3.1.1.2 受試部位至少有一個和周圍鄰近皮膚的ITA°差值大于10°的明顯色斑，且直徑不小于3mm（不能是臨床上使用外用制劑難以改善的雀斑、色素痣等）；

3.1.1.3 無過敏性疾病，無化妝品及其它外用制劑過敏史；

3.1.1.4 既往無光感性疾病史，近期內(nèi)未使用影響光感性的藥物；

3.1.1.5 受試部位皮膚應(yīng)無胎記、炎癥、瘢痕、多毛等現(xiàn)象；

3.1.1.6 能夠理解試驗(yàn)過程，自愿參加試驗(yàn)并簽署書面知情同意書者。

3.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

3.1.2.1 妊娠或哺乳期婦女，或近期有備孕計劃者；

3.1.2.2 患有銀屑病、濕疹、異位性皮炎、嚴(yán)重痤瘡等皮膚病史者；或患有其他慢性系統(tǒng)性疾病者；

3.1.2.3 近1個月內(nèi)口服或外用過皮質(zhì)類固醇激素等抗炎藥物者；

3.1.2.4 近2個月內(nèi)使用過果酸、水楊酸等任何影響皮膚顏色的產(chǎn)品或藥物（如氫醌類制劑）者；

3.1.2.5 近3個月內(nèi)試驗(yàn)部位使用過維A酸類制劑或進(jìn)行過化學(xué)剝脫、激光、脈沖光等醫(yī)美**者；

3.1.2.6 不可避免長時間日光暴露者；

3.1.2.7 近2月內(nèi)參加過其他臨床試驗(yàn)者；

3.1.2.8 其他臨床評估認(rèn)為不適合參加試驗(yàn)者。

3.1.3 受試者限制

3.1.3.1 在試驗(yàn)期間受試部位必須使用試驗(yàn)機(jī)構(gòu)提供的試驗(yàn)產(chǎn)品或?qū)φ债a(chǎn)品，不能使用其他任何具有祛斑美白功效或者可能對測試結(jié)果產(chǎn)生影響的產(chǎn)品；

3.1.3.2 在試驗(yàn)期間不能有暴曬情況，并應(yīng)做好試驗(yàn)部位的防曬工作。

3.2 受試物

3.2.1 試驗(yàn)產(chǎn)品：祛斑美白化妝品。

3.2.2 對照產(chǎn)品：不含祛斑美白功效成分的相應(yīng)試驗(yàn)產(chǎn)品基質(zhì)配方產(chǎn)品，與試驗(yàn)產(chǎn)品平行測試。

3.2.3 使用方法：由工作人員按照隨機(jī)表發(fā)放試驗(yàn)產(chǎn)品和對照產(chǎn)品，并根據(jù)使用說明對受試者進(jìn)行使用指導(dǎo)，確保受試者正確、連續(xù)使用產(chǎn)品8周；受試部位左右隨機(jī)分側(cè)使用兩組產(chǎn)品時，需采用能夠確保受試者正確區(qū)分和使用兩側(cè)試驗(yàn)產(chǎn)品和對照產(chǎn)品的監(jiān)控措施（如在試驗(yàn)機(jī)構(gòu)工作人員的指導(dǎo)、監(jiān)督下使用等），并在試驗(yàn)報告中說明產(chǎn)品使用的監(jiān)控方式。要求受試者記錄使用時間及使用過程中的任何不適感和不良反應(yīng)癥狀。

3.3 試驗(yàn)部位：根據(jù)產(chǎn)品使用說明確定需要使用祛斑美白化妝品的試驗(yàn)部位（如面部）。

3.4 儀器設(shè)備

3.4.1 皮膚色度儀：具有可以測量國際照明**（CIE）制定的L*a*b*顏色空間數(shù)據(jù)的儀器。

3.4.2 皮膚黑素檢測儀：具有基于光譜吸收的原理檢測皮膚MI值的儀器。

3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)圖像拍攝設(shè)備：能夠拍攝正面、左側(cè)和右側(cè)面部或其它受試部位圖像，具有可見光/偏振光濾鏡的拍攝系統(tǒng)。

3.5 環(huán)境條件

試驗(yàn)結(jié)果觀察應(yīng)在溫度為21±1°C、相對濕度為50±10% RH的恒定環(huán)境下進(jìn)行，視覺評估還應(yīng)在恒定光照條件（色溫5500~6500K的日光燈管或LED光照）下進(jìn)行，并且所有受試者應(yīng)在此環(huán)境條件下適應(yīng)至少30分鐘后方可進(jìn)行評估和測試。

3.6 試驗(yàn)流程

3.6.1 按照要求招募入組志愿受試者，簽署書面知情同意書。入組前根據(jù)入選和排除標(biāo)準(zhǔn)等詢問受試者一系列關(guān)于疾病史、健康狀況等問題，同時對試驗(yàn)部位色斑等皮膚狀況進(jìn)行符合性評估和膚色測試篩選，并記錄。

3.6.2 對入組的合格受試者進(jìn)行產(chǎn)品使用前皮膚基礎(chǔ)值評估和測試，包括視覺評估、儀器測試和標(biāo)準(zhǔn)圖像拍攝，并記錄；產(chǎn)品使用后2周、4周、8周再次進(jìn)行相同的評估和測試。

3.6.2.1 視覺評估

在各訪視時點(diǎn)，由經(jīng)過培訓(xùn)的皮膚科醫(yī)生借助由淺至深膚色的色卡對試驗(yàn)部位色斑區(qū)進(jìn)行膚色評估，并記錄評分。

3.6.2.2 皮膚色度以測量

在各訪視時點(diǎn)，用皮膚色度儀分別測量試驗(yàn)組（側(cè)）及對照組（側(cè)）試驗(yàn)部位色斑區(qū)皮膚的L*、 a*、 b* 數(shù)值，每個測試區(qū)測試三次，記錄并計算ITA°值。測試皮膚區(qū)域ITA°值越大，膚色越淺，反之越深。

3.6.2.3 皮膚黑素檢測儀測量

在各訪視時點(diǎn)，用皮膚黑素測試儀分別測量試驗(yàn)組（側(cè)）及對照組（側(cè)）試驗(yàn)部位色斑區(qū)皮膚的MI值，每個測試區(qū)測試三次，并記錄；測試區(qū)MI值越小，膚色越淺，反之越深。

3.6.2.4 圖像攝取和分析

在各訪視時點(diǎn)，采用皮膚圖像拍攝系統(tǒng)拍攝標(biāo)準(zhǔn)圖像。用圖像分析軟件分析受試部位不同訪視時點(diǎn)相關(guān)參數(shù)（色斑光密度均值、色斑面積占比），并記錄；受試部位圖像色斑光密度均值越小，膚色越淺。

3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

應(yīng)用統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。計量資料表示為：均值±標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布要求，自身前后的比較采用配對t檢驗(yàn)，否則采用兩個相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)；等級資料使用前后的比較，采用兩個相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)；試驗(yàn)產(chǎn)品和對照組之間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)。上述統(tǒng)計分析均為雙尾檢驗(yàn)，顯著性水平為α=0.05。

3.8 試驗(yàn)結(jié)論

試驗(yàn)組（側(cè)）使用產(chǎn)品前后任一訪視時點(diǎn)視覺評估、儀器測試或圖像分析相關(guān)參數(shù)中任一參數(shù)的變化結(jié)果相差顯著（P<0.05），或使用樣品后測試值結(jié)果顯著**對照組（側(cè)）結(jié)果時（P<0.05），則認(rèn)定試驗(yàn)產(chǎn)品有祛斑美白功效，否則認(rèn)為試驗(yàn)產(chǎn)品無祛斑美白功效。

4 檢驗(yàn)報告

檢驗(yàn)報告應(yīng)包括下列內(nèi)容：樣品編號、名稱、生產(chǎn)批號、生產(chǎn)及送檢單位、樣品物態(tài)描述以及檢驗(yàn)起止時間等，檢驗(yàn)項(xiàng)目、材料和方法、檢驗(yàn)結(jié)果、結(jié)論。檢驗(yàn)報告應(yīng)有授權(quán)簽字人簽字，歸檔報告應(yīng)有檢驗(yàn)人、校核人和授權(quán)簽字人分別簽字，均需加蓋試驗(yàn)機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)檢測**章或公章。其中檢驗(yàn)結(jié)果以表格形式給出，如下表1~3：

表1 試驗(yàn)產(chǎn)品及對照檢測結(jié)果

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注：計量資料數(shù)據(jù)結(jié)果表

表2 試驗(yàn)產(chǎn)品及對照檢測結(jié)果

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注：計量資料數(shù)據(jù)結(jié)果表

表3 試驗(yàn)產(chǎn)品及對照檢測結(jié)果

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注：等級資料數(shù)據(jù)結(jié)果表

（信息來源：國家藥監(jiān)局；編發(fā)：北京天健華成國際投資顧問有限公司化妝品注冊部）


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