TwistDx公司重組酶聚合酶擴增技術(shù)（RPA）

時間：2023-06-06作者：北京立博泰業(yè)科技有限公司瀏覽：84

TwistDx 的重組酶聚合酶擴增（RPA）將徹底改變在資源有限的現(xiàn)場環(huán)境中擴增和檢測核酸的能力。

RPA 技術(shù)原理

RPA 體系的重點是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復(fù)合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對。單鏈 DNA 結(jié)合（SSB）蛋白與被取代的 DNA 鏈結(jié)合，并使形成的 D 環(huán)保持穩(wěn)定。然后從引物啟動由聚合酶介導(dǎo)的 DNA 擴增，但前提是存在靶標序列。一旦啟動，擴增反應(yīng)將快速進行，因此開始時只需一點靶標 DNA 拷貝數(shù)，高特異性 DNA 擴增在數(shù)分鐘內(nèi)即可達到可檢出水平。

RPA 循環(huán)


RPA 的技術(shù)特點

為什么選擇 RPA 方法?

◇ 速度

RPA 非常快速，在 37～42 °C 這一通常較適宜的反應(yīng)溫度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分鐘（通常）內(nèi)擴增至可檢出水平，但這將取決于靶標大小。在大部分情況下，只需要一個人即可在半小時內(nèi)采集樣本、制備樣本、運行檢測并**結(jié)果，并且*專業(yè)培訓(xùn)。

◇ 靈敏度

RPA 可檢測復(fù)合樣本中的單拷貝 DNA 和 10 拷貝甚至較少 RNA，而*預(yù)先純化核酸。

◇ 特異性

RPA 具有高度特異性，該技術(shù)可從可能含有數(shù)百納克來自多個不同物種的不相關(guān)復(fù)合基因組 DNA（包括人 DNA）的樣本中識別并擴增單個 DNA 分子，抗干擾能力強。

◇ 恒溫運行

RPA 在恒定的低溫（37～42 °C 較適宜）下運行。對于某些應(yīng)用，如果需要，即便體溫也可支持 RPA 擴增。該反應(yīng)在偏離溫度及低溫設(shè)置下也表現(xiàn)穩(wěn)健，即使在常規(guī)室溫 25 °C 下也將奏效，雖然反應(yīng)速度會下降; 在此溫度下，只要此生物化學(xué)過程被正確配置，仍可在一小時內(nèi)獲得結(jié)果。

◇ 樣本容差

RPA 對樣本類型的要求寬松，有時可直接檢測未經(jīng)核酸純化的原始樣本，例如血液、鼻拭子或培養(yǎng)基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的較合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設(shè)計到檢測程序中。RPA 對某些復(fù)合樣本類型的寬容性使該技術(shù)非常適合廣泛的現(xiàn)場實地應(yīng)用。

◇ 廣泛的適用性

RPA 能夠方便地應(yīng)用于任何 DNA 或 RNA 靶標，無序列偏好性，這一點對于 NGS 尤其重要。如果將逆轉(zhuǎn)錄酶添加到反應(yīng)混合液中開發(fā)出了**高靈敏度的 RNA 一步檢測法。

◇ 多重檢測

通過將多種引物同時添加到同一反應(yīng)管中，單次 RPA 測試即可擴增和檢測多種不同的靶標。

◇ 低設(shè)備成本

RPA 僅需要基本的檢測設(shè)備，也就是說，較終用戶可以使用 RPA 技術(shù)開發(fā)出適合各種應(yīng)用和環(huán)境的人性化診斷方法和試劑盒。

◇ 靈活的試劑形態(tài)

**反應(yīng)組分能夠以穩(wěn)定的干燥形態(tài)供貨，該形態(tài)易于運輸，且*冷藏即可儲存較多 12 個月（穩(wěn)定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長期儲存），也能夠以 PCR 試劑較常見的液體形態(tài)供貨，該形態(tài)允許用戶針對特定的應(yīng)用改變反應(yīng)體積和組分比例。

◇ 多種檢測形式

RPA 可應(yīng)用于各種檢測系統(tǒng)和儀器，包括實時熒光探針和夾心法等形式。


RPA 與 其他核酸擴增方法 PCR 及 LAMP 的比較







北京立博泰業(yè)科技有限公司專注于離心機,三代測序,純水儀,正倒置一體研究級顯微鏡等

• 詞條

  詞條說明

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