PCR實驗室發(fā)生核酸氣溶膠污染怎么辦

常見的污染的來源

（１）試劑污染 由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣器、容器、水及其他溶液被核酸污染。

（２）設(shè)備污染 半自動核酸提取儀、全自動核酸提取儀在提取過程導(dǎo)致濺灑樣本或者核酸模板，污染機器?；蛘咴O(shè)備內(nèi)垃圾筒清潔不徹底，殘留液體或結(jié)晶揮發(fā)形成氣溶膠對造成污染。

（３）標本交叉污染 可能是由于收集標本的容器被污染，標本放置時由于密封不嚴溢于容器外，容器外黏有標本，吸樣器污染及空氣中的氣溶膠導(dǎo)致的標本間交叉污染。尤其是病毒類可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導(dǎo)致彼此間的污染。

（４）PCR擴增產(chǎn)物污染 這是PCR中較常見的污染問題，常見于需要在擴增后開蓋的檢測項目，或者是擴增后產(chǎn)物處理不當，因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠遠**PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以較微量的PCR產(chǎn)物污染就可形成假陽性。

（５）克隆質(zhì)粒的污染 在實驗室操作中經(jīng)常會用到陽性參考品，這些陽性參考品大多數(shù)是由某些用克隆質(zhì)粒制作而成，克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用較易造成污染。有些實驗室自己克隆質(zhì)粒做質(zhì)控品，配制過程后，垃圾的處理方式不嚴格等，從而造成質(zhì)控品對實驗室的污染進而造成實驗室對標本的污染。

控制污染的措施

（1）實驗分區(qū)域 合理分隔實驗室。將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進行，特別注意標本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng)與其他步驟嚴格分開。較好能劃分：標本處理區(qū)，PCR反應(yīng)液制備區(qū)，PCR循環(huán)擴增區(qū)，PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實驗用品及吸樣槍應(yīng)**。實驗前應(yīng)將實驗室用紫外線消毒以破壞殘留的 DNA 或RNA。

(2) 各區(qū)物品不得混用 各個實驗區(qū)域要對不同設(shè)備、物品顏色有明顯的標記，如各區(qū)域使用專門的工作服、工作鞋、垃圾桶、拖把、抹布、筆等，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。使用一次性用具吸頭、離心管、無粉塵手套、口罩等

（3）設(shè)置規(guī)范的空調(diào)通風系統(tǒng) 盡可能采用全送全排空調(diào)系統(tǒng)。在進入各個操作區(qū)域需要嚴格單*向進行，即試劑準備和貯存區(qū)→樣品制備區(qū)→ＰＣＲ擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆行。

（4）污染監(jiān)測 設(shè)立陽性對照、陰性對照，進行重復(fù)試驗，選擇不相同區(qū)域的引物進行ＰＣＲ擴增等，做好污染監(jiān)測，以便采取措施防止和消除污染。

（5）定期實驗室清潔 1) 日常清潔：實驗前后用PCR Cleaner重點清潔實驗臺面、**凈工作臺及儀器表面等*產(chǎn)生核酸污染的區(qū)域（可用盒裝）。2) 周/月清潔：清潔范圍可擴大至：實驗室墻面、試劑架、地面、玻璃、門把手及實驗服等接觸較多的區(qū)域（可用桶裝）。

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