奧林巴斯熒光顯微鏡錯(cuò)誤

時(shí)間：2020-03-19作者：蘇州思凱得電子科技有限公司瀏覽：592

熒光照射條件下的顯微照相呈現(xiàn)出一組*特的環(huán)境，為顯微鏡*帶來了特殊問題。曝光時(shí)間通常非常長（在某些情況下從幾秒鐘到幾分鐘），樣品的熒光在曝光期間可能會(huì)褪色，而完全黑色的背景通常會(huì)無意中發(fā)出光度計(jì)信號(hào)，表明過度曝光。

另外，熒光標(biāo)本**它們自己的光，并且位于所需焦平面上方和下方的粒子經(jīng)常輻射光，導(dǎo)致圖像細(xì)節(jié)模糊。盡管通過顯微鏡目鏡觀察時(shí)熒光圖像可能看起來很亮（由于人眼對(duì)光線的敏感性），但為了在膠片上記錄令人滿意的圖像，它們通常需要較長的曝光時(shí)間。非常長的曝光使得用熒光染料染色的樣本的顯微照相復(fù)雜化，增加了振動(dòng)的可能性和膜互易失效效應(yīng)，導(dǎo)致圖像中不希望的色移。

雖然熒光顯微照相的基本問題通常是光線到達(dá)膠片的缺乏，但是可以采取許多步驟來改善圖像質(zhì)量。用于熒光的顯微鏡物鏡應(yīng)具有盡可能高的數(shù)值孔徑，在實(shí)驗(yàn)中使用光波長的高透射率值。因?yàn)楣鈴?qiáng)度（反射光熒光）隨數(shù)值孔徑的四次方變化，所以這些物鏡可以顯著減少反射光熒光顯微鏡中的曝光時(shí)間。光強(qiáng)度也與放大倍數(shù)的平方成反比變化，當(dāng)膠片上的總放大率保持較小時(shí)，導(dǎo)致較亮的圖像。通常使用低放大率光學(xué)鏡（或投影鏡頭）來輔助降低膠片平面上的放大率。此外，當(dāng)使用三目頭時(shí)，通常希望將所有光轉(zhuǎn)向攝像機(jī)，而不是在觀察目鏡和攝像機(jī)之間進(jìn)行光分離（通過分束器）。因?yàn)閳D像強(qiáng)度也與到膠片平面的距離的平方成反比地變化，所以顯微鏡表現(xiàn)得較好，然后該距離保持很短。出于這個(gè)原因，并且由于廣泛的可用性，當(dāng)使用傳統(tǒng)的顯微攝影術(shù)捕獲圖像時(shí)，大多數(shù)熒光顯微鏡記錄在35毫米膠片上（而不是較大的格式）。

低光照水平和熒光標(biāo)本的褪色是熒光顯微照相術(shù)中要克服的兩個(gè)主要困難。通常，熒光制劑的動(dòng)態(tài)性質(zhì)使得良好的顯微攝影術(shù)對(duì)于捕獲與樣本發(fā)生的事件的記錄是必要的，并且通常可以在通過目鏡檢查樣本時(shí)揭示不明顯的細(xì)節(jié)。長時(shí)間曝光，如此常用于熒光，不可避免地導(dǎo)致在長時(shí)間照射期間的互易失效和樣本熒光強(qiáng)度的褪色。實(shí)際上，特定熒光特征的衰落通常比背景的快，導(dǎo)致圖像對(duì)比度的損失。

所有照相乳劑（包括黑色和白色，彩色負(fù)片和彩色透明膜）在暴露于光下**過長時(shí)間或短時(shí)間時(shí)都會(huì)受到稱為互易律失效的影響?；ヒ茁蓪D像密度與曝光時(shí)間和光強(qiáng)度聯(lián)系起來，使得顯微鏡中的照明強(qiáng)度與膠片所需的曝光時(shí)間之間存在相互關(guān)系。實(shí)際上，該法律規(guī)定曝光時(shí)間與光強(qiáng)度成反比，以保持恒定的膠片密度。光強(qiáng)度越低，產(chǎn)生令人滿意的圖像所需的曝光時(shí)間越長。如果適當(dāng)?shù)钠毓獬掷m(xù)時(shí)間在1/500秒和1/2秒之間，則這種反比關(guān)系適用于大多數(shù)膠片。

在熒光顯微鏡中，低光照水平通常需要**過1/2秒的曝光（通常在幾秒到幾分鐘的范圍內(nèi)）。在這些條件下，互易關(guān)系不再成立，并且膠片將需要額外的曝光時(shí)間以產(chǎn)生適當(dāng)?shù)膱D像密度。這種現(xiàn)象稱為互易失效，該術(shù)語僅表示曝光時(shí)間和光強(qiáng)度之間的線性關(guān)系不再成立，并且不表示薄膜乳液在性能方面的失效。

互易律失效的副作用是通過樣品的光漂白進(jìn)一步降低已經(jīng)很弱的樣品熒光，并且由于曝光時(shí)間增加經(jīng)常發(fā)生不正確的顏色再現(xiàn)。圖2中呈現(xiàn)的一系列圖像是熒光顯微照片，其示出了當(dāng)使用Olympus WIB長通熒光立方體成像時(shí)用流行的熒光素-5-異硫氰酸酯（FITC）標(biāo)記的抗體熒光染料。使用針對(duì)互易律失效校正的校正曝光時(shí)間和Kodak Wratten顏色補(bǔ)償濾光器拍攝中心的單元（圖2（b）），以消除不希望的色移。在左側(cè)（圖2（a）），相同的視野顯示了由于長時(shí)間暴露于照射源而導(dǎo)致的光漂白或熒光活性的褪色的影響。

通?？梢酝ㄟ^增加曝光時(shí)間或黑白膠片的加工條件來補(bǔ)償互易失效，但對(duì)于彩色負(fù)片和透明膠片來說并非總是如此。大多數(shù)彩色膠片具有三個(gè)顏色敏感的染料層，每個(gè)顏色敏感的染料層具有略微不同的特征曲線位置和斜率，導(dǎo)致對(duì)互易效應(yīng)的變化響應(yīng)，可能引起不希望的顏色偏移或鑄造。通常，在使用彩色膠片時(shí)，必須調(diào)整曝光時(shí)間和色彩平衡濾光片以補(bǔ)償非常長或短的曝光。

利用具有非常小的數(shù)值孔徑的物鏡（例如，具有NA = 0.65的40x物鏡而不是具有0.85,0.95或1.0的NA的相同放大物鏡）產(chǎn)生顯示亮度不足的圖像，這導(dǎo)致較長的時(shí)間曝光時(shí)間。數(shù)值孔徑是物鏡聚光能力的量度，意味著高數(shù)值孔徑物鏡可以捕獲較大量的發(fā)色團(tuán)產(chǎn)生的弱熒光**。在進(jìn)行熒光顯微照相時(shí)，始終使用較高可用的物鏡數(shù)值孔徑。使用過多的物鏡和光電目鏡放大也會(huì)導(dǎo)致亮度降低。為了彌補(bǔ)這一點(diǎn)，在給定的放大倍數(shù)下，始終采用盡可能低的放大率光學(xué)物鏡和較高數(shù)值孔徑物鏡。例如，數(shù)值孔徑為0.95（亮度指數(shù)= 22.6）的60x平面復(fù)消色差物鏡**數(shù)值孔徑等于0.85（亮度指數(shù)= 14.5）的60x平面螢石物鏡，即使螢石物鏡的工作距離為復(fù)消色差的兩倍。此外，由于高數(shù)值孔徑物鏡具有較淺的景深，因此它們的使用可以避免從焦平面上方或下方的離焦**的對(duì)比度降低效應(yīng)。同樣，2.5x光鏡將提供比3.3x或5x目鏡更多的照明。


蘇州思凱得電子科技有限公司專注于愛爾博氬氣刀,奧林巴斯胃腸鏡,強(qiáng)生超聲刀,奧林巴斯腹腔鏡,奧林巴斯支氣管鏡,史托斯腹腔鏡等, 歡迎致電 15962445257

• 詞條

  詞條說明

• 愛爾博氬氣刀

  品牌：Erbe德國愛博型號(hào)：20192-117愛爾博氬氣刀結(jié)構(gòu)及組成：由VIO系列高頻電外科系統(tǒng)主機(jī)和可供選配的氬等離子體凝固器(俗稱氬氣控制器)、VIO臺(tái)車、儀器筐、雙較等離子適配器及連接電纜、氬氣電弧測試器、單較連接電纜、雙較連接電纜、腳踏開關(guān)和電源線組成。具有單較電切、單較電凝、雙較電切、雙較電凝、氬等離子凝固、大血管閉合以及鹽水下等離子切割功能。具體型號(hào)、輸出模式及參數(shù)見附頁。愛爾博氬氣刀

• 電腦驗(yàn)光儀的詳解及使用細(xì)則

  電腦驗(yàn)光儀是電子化的客觀驗(yàn)光設(shè)備，是屈光檢查技術(shù)和電子計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。測量時(shí)*臨床醫(yī)師和被檢者的主觀判斷，通過事先設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)，客觀地評(píng)估屈光參數(shù)。由于電腦驗(yàn)光簡單、快速、學(xué)習(xí)周期短，適用于快速獲取客觀屈光度并作為主覺驗(yàn)光的起點(diǎn)或用于日常的眼保健篩查。隨著高科技在電腦驗(yàn)光儀中的應(yīng)用，電腦驗(yàn)光儀的準(zhǔn)確性有了較大的提高，許多儀器整合了角膜曲率計(jì)或角膜地形圖的功能，并且部分廠商的儀器與綜合驗(yàn)光儀

• 【愛爾博氬氣刀】氬氣刀的優(yōu)勢有哪些

  氬氣刀的優(yōu)勢有哪些？?????氬氣刀的工作原理高頻氬氣刀是近年來臨床應(yīng)用新一代高頻電刀。其工作原理是利用高頻電刀提供的高頻高壓電流，再利用氬氣（其特點(diǎn)可以達(dá)到理想的臨床效果）。氬氣的特點(diǎn)氬是一種惰性氣體，性能穩(wěn)定，無毒無味，對(duì)人體無害，被電離為氨(離子，這種氬“在高頻高壓下(離子具有優(yōu)良的導(dǎo)電性)并能持續(xù)地傳輸電流”。然而，氬本身是惰性的，它可以降

• 奧林巴斯熒光激發(fā)塊的組成結(jié)構(gòu)

  應(yīng)用于熒光濾光片的術(shù)語由于不同制造商用于識(shí)別其濾光片的各種首字母而變得混亂。在這個(gè)討論中，我們?cè)噲D對(duì)這個(gè)令人困惑的術(shù)語做出一些順序?；旧嫌腥悶V波器需要分類：激發(fā)濾光片，屏障濾波器和二色分光鏡（二向色鏡）通常組合起來產(chǎn)生類似于圖1所示的濾波器激發(fā)塊。正確選擇濾波器是關(guān)鍵成功的熒光顯微鏡。激發(fā)濾光片僅允許來自照明器的選定波長在朝向樣本的途中通過。屏障濾光片是設(shè)計(jì)用于抑制或阻擋（吸收）激發(fā)波長并僅允