較快找到技術(shù)問題的答案

時間：2014-08-21作者：深圳市安必勝科技有限公司瀏覽：176

作者：Michelle Tetreault Carlson 來源：美國MoBio實驗室

無論是不知道該選擇哪款DNA提取試劑盒還是提取操作上有問題，MO BIO技術(shù)支持都可以幫到您。我們多半會遇到一些類似的問題，可以很快給出答案。然而有時也是要耗點腦筋。通常是因為我們沒有足夠的信息來解決。此時，我們會寫郵件或回電話給您，詢問更多細(xì)節(jié)（根據(jù)具體情況），我們可能會問更多問題。當(dāng)我們還在來回交流問題時，其實我們了解您很希望能趕緊回到研究當(dāng)中。于是我們想也許為您列出一些提示，使得問題解決過程較流暢。這里總結(jié)出五個關(guān)鍵要素。這個列表并不全面，但是，如果您能即時給我們提供相關(guān)信息，我們會較快地讓您的實驗回到正軌。

動物的、植物的，還是礦物的？

對于起始樣品的成分，了解得越具體越好。如果樣品是植物，那是植物哪個部位？是葉片、根還是種子？是什么種類？如果樣品是土壤，土壤成分是什么？它的**物、沙、淤泥或黏土含量是高是低？濕潤還是干燥？會不會有什么不尋常的物質(zhì)可能會影響土壤化學(xué)性質(zhì)？例如，它是從一個銅礦或鹽湖地采集的來的。諸如此類的信息對于確定較佳方案是很重要的。

樣品采集和保存

使用DNA/RNA提取試劑盒之前，要收集并保存樣品。這些操作同樣品的組成成分一樣重要，尤其是用來提RNA的。讓我們知道樣品的保存溫度，室溫、4℃、-20℃，抑或是-80℃。從收集樣品到冷凍保存是否有耽誤？是否使用了像RNALater、或福爾馬林等保護液也很關(guān)鍵。保護液會影響細(xì)胞裂解、DNA純化和酶促反應(yīng)。有時也應(yīng)該略知樣品的由來。比如，您作為一個研究生，從實驗室搭檔那兒接到的樣品。如果也不是確定，告訴我們您所知道的任何信息也好。

您要獲得什么？

有些客戶在處理一些含各種不同細(xì)胞的復(fù)雜樣品。所以在向我們咨詢技術(shù)問題時，應(yīng)讓我們知道目標(biāo)細(xì)胞類型是什么。比如，糞便樣本可能會含人體細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞和細(xì)菌細(xì)胞。如果您只對人體細(xì)胞的DNA感興趣，我們會建議撤掉研磨珠擊打步驟，改而添加蛋白酶K消化。然而，如果您要檢測諸如真菌孢子等難裂解細(xì)胞的DNA，我們建議換用較強力的珠磨研磨，和耐受性較好的研磨珠。 此外，讓我們知道您想要的是什么類型的核酸。是基因組、質(zhì)粒、線粒體DNA，還是rRNA、mRNA或小RNA。甚至都要。無論如何，讓我們知道越多細(xì)節(jié)越好！

加樣量

MO BIO的每款試劑盒已按特定樣品類型和加樣量進行了優(yōu)化。所以，如果您的樣品不標(biāo)準(zhǔn)，請給我們提供線索。有時，客戶會增加樣品量或提取一個與試劑盒功能不符的樣品類型。例如，正常的PowerSoil操作說明要求稱取250mg土壤，然而，如果將PowerSoil試劑盒用于提取葉片中的微生物DNA，加250mg樣品并不合適。這個量的葉片含有的生物量和抑制因子水平與250mg土壤含有的量不同。葉片的細(xì)胞數(shù)量和抑制因子含量更多，因此起始樣品量要減少。 同時請記住，我們的試劑盒常規(guī)說明書是為新鮮樣品優(yōu)化的。如果是凍干樣品，加樣量要減少。凍干植物組織或糞便通常需要使用新鮮組織量的5-10%。像所有生物樣品一樣，它們大多數(shù)都是水分。

均質(zhì)化

產(chǎn)率低通常是細(xì)胞裂解不充分導(dǎo)致。我們大部分試劑盒都采用珠磨研磨，使用細(xì)碎的研磨珠在密閉塑料管中較樣品進行擊打破碎。該過程可使用帶有適配器的渦旋儀或強力珠磨研磨設(shè)備，比如PowerLyzer 24孔強力珠磨破碎儀。所以讓我們知道所使用的儀器、樣品的研磨和時間以及研磨珠套管的類型。如果使用的不是我們的渦旋儀適配器，請告訴我們型號。通常解決產(chǎn)率低的方式就是換合適的適配器或珠磨研磨套管等簡單的操作。

最后一點

對說明書做的任何改動，哪怕非常小，都有可能影響提取結(jié)果。很多時候，我們絞盡腦汁去想為什么這個客戶的DNA提取總是失敗，說話之間他們提到了使用兩倍加樣量或用了保護劑，這都與試劑盒不兼容。所以，即便只是一絲疑惑，也歡迎與我們交流。給我們提供的信息越多越好。請記住，你的問題很可能其他人已經(jīng)有過。所以不要猶豫聯(lián)系技術(shù)支持，哪怕你認(rèn)為是一個很蠢的問題。我們將會為您節(jié)省大量的時間！

 


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