如何處理高鹽分土樣

時間：2014-12-19作者：深圳市安必勝科技有限公司瀏覽：190

作者：Michelle Tetreault Carlson 來源：美國MoBio實驗室【字號：大 中 小】

MO BIO技術(shù)部：

我在使用RNA Power Soil Total RNA Isolation kit處理一些高鹽含量的土壤樣品，結(jié)果提取出來的全是DNA而不是RNA，這是怎么回事呢？

Thao：

您好!

提取含鹽量高的土壤或其它類型樣品需要些技巧。RNA PowerSoil Total RNA Isolation kit(貨號：12866-25）使用的是陰離子交換樹脂來吸附和洗滌核酸。在低鹽條件下，帶負(fù)電荷的RNA/DNA被牢牢吸附綁定在帶正電荷的樹脂上。高鹽條件下，它們彼此的極性會被掩蓋。通過調(diào)節(jié)離心柱所使用緩沖液的鹽濃度可控制RNA或DNA的洗脫。逐漸提高鹽濃度的過程中，先洗脫下來的是RNA，然后洗脫DNA。然而，如果處理的是高鹽含量的土樣，會改變樹脂所處的緩沖環(huán)境，這就是你現(xiàn)在面臨的狀況。土樣中殘留的過高鹽分導(dǎo)致較終洗脫下來的是DNA而非RNA。

為了去除這些起干擾作用的鹽份，可以對土樣進(jìn)行洗滌。把樣品加入到15ml滅菌收集管中，再加入10ml滅菌PBS，短暫渦旋混勻，10,000 x g離心2min，棄上清。這樣重復(fù)洗滌3次，效果會好很多。

祝好!

MO BIO 技術(shù)

附

金屬含量高的土樣也會影響試劑盒的提取效果，我們建議使用滅菌的TE緩沖液（10 mM Tris, 1 mM EDTA）對這種類型的土壤進(jìn)行重復(fù)洗滌。在此，EDTA可起到螯合金屬離子的作用。操作同上，將TE緩沖液和樣品都加入到收集管內(nèi)，渦旋混勻，然后離心沉淀細(xì)胞和土壤顆粒，棄去上清，根據(jù)實際需要可以多洗幾遍。


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