免疫學(xué)檢測方法

時(shí)間：2022-06-07作者：廣東省華微檢測股份有限公司瀏覽：311

免疫學(xué)檢測方法是實(shí)驗(yàn)室較常用的檢測方法，從凝集試驗(yàn)、膠體金到ELISA。未來，隨著檢測方法向高通量、自動(dòng)化方向發(fā)展，化學(xué)發(fā)光法將是大勢所趨！


概括：


化學(xué)發(fā)光技術(shù)壁壘高的根本原因是：1）被檢測物質(zhì)濃度低（μg/L—pg/L），導(dǎo)致整個(gè)檢測系統(tǒng)的精度要求很高，儀器封閉及試劑系統(tǒng)；2）整個(gè)檢測過程步驟多，難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化；3）包括生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、光學(xué)等學(xué)科在內(nèi)的多種*技術(shù)缺一不可。


國內(nèi)外主流試劑技術(shù)大同小異，主流包括直接化學(xué)發(fā)光（異魯米諾（新工業(yè)）、吖啶酯（雅培））、間接（酶促）化學(xué)發(fā)光（丹納赫、邁瑞、安圖）、電化學(xué)發(fā)光化學(xué)（羅氏）等。各有優(yōu)劣，技術(shù)較新?lián)Q代趨勢不明顯，但電化學(xué)發(fā)光被認(rèn)為是*三代技術(shù)，在技術(shù)上略良好。


試劑的性能包括準(zhǔn)確度、靈敏度、線性范圍、抗干擾能力、儲(chǔ)存穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、試劑盒規(guī)格等；機(jī)器的性能包括檢測速度、試劑位置、樣品位置、儀器尺寸等，準(zhǔn)確度是**與認(rèn)證產(chǎn)品對比得出的；其他性能間接影響精度，需要結(jié)合具體項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)、廠家性能和客戶需求綜合評價(jià)。


化學(xué)發(fā)光有什么作用？


化學(xué)發(fā)光在臨床實(shí)踐中得到廣泛應(yīng)用。化學(xué)發(fā)光是一種免疫診斷。它是利用抗原和抗體之間的特異性反應(yīng)來確定體內(nèi)疾病標(biāo)志物的濃度，從而判斷人體的身體狀態(tài)的一種診斷方法。廣泛應(yīng)用于傳染病、心臟病、**、妊娠檢測等。


有100多個(gè)免疫檢測標(biāo)志物。根據(jù)它們在免疫反應(yīng)中的作用，標(biāo)記物可分為抗體和抗原?？乖ù蠓肿涌乖托》肿涌乖?br>

化學(xué)發(fā)光原理


免疫反應(yīng)。抗原進(jìn)入人體，**人體的免疫系統(tǒng)，使其產(chǎn)生免疫反應(yīng)，稱為免疫反應(yīng)。免疫反應(yīng)包括對抗原物質(zhì)的誘導(dǎo)、反應(yīng)和作用三個(gè)連續(xù)階段。


免疫測定（IA）。在臨床試驗(yàn)中，根據(jù)抗原與其配對抗體的特異性反應(yīng)，用已知的抗原或抗體對體液中的抗體或抗原物質(zhì)進(jìn)行檢測和分析。


特異性高。抗原-抗體結(jié)合基本上僅發(fā)生在抗原的抗原決定簇和抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上的互補(bǔ)關(guān)系，抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性?？乖贵w反應(yīng)的高特異性是免疫學(xué)檢測的基礎(chǔ)。


親和力高?？乖c抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab。高親和力抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)和抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常合適，兩者結(jié)合牢固，不易解離。


免疫分析技術(shù)的發(fā)展：


美國臨床化學(xué)會(huì)議規(guī)定所有測量光子計(jì)數(shù)的方法都是化學(xué)發(fā)光法。


化學(xué)發(fā)光與ELISA相比的進(jìn)步：


1.全自動(dòng)化——機(jī)械自動(dòng)化；


2.定量技術(shù)優(yōu)化：利用化學(xué)發(fā)光精確計(jì)算光子數(shù)——光學(xué)；


3.磁粉的應(yīng)用——材料；


4.抗體標(biāo)記技術(shù)的進(jìn)展——生物化學(xué)。


五種免疫診斷方法比較：化學(xué)發(fā)光是趨勢


與其他免疫診斷方法相比，化學(xué)發(fā)光法以其在安全性、自動(dòng)化操作、準(zhǔn)確度、速度等方面的系統(tǒng)優(yōu)勢成為免疫診斷的主流。


化學(xué)發(fā)光步驟很多。


化學(xué)發(fā)光原理解析：以酶法（一步法）為例


按沖洗次數(shù)可分為一步法、二步法、三步法等，四步法；


各組分用量在5~200uL水平；


所有過程都需要在特定溫度下進(jìn)行；


樣品中與檢測到的抗原/抗體結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)對結(jié)果的影響較大；


磁粉標(biāo)記-分離技術(shù)


磁性顆粒是指表面帶有活性基團(tuán)的納米級磁性顆粒；


磁性顆?？梢允褂帽砻嫔系幕钚曰鶊F(tuán)與抗體、抗原和鏈霉親和素連接；


隨著磁粉技術(shù)的發(fā)展，板式發(fā)光已基本被取代。


磁粉分離技術(shù)特點(diǎn)：


?與微孔板相比，擴(kuò)大了抗原抗體結(jié)合的表面積，增加了抗原或抗體的結(jié)合能力，提高了檢測靈敏度。


? 加快反應(yīng)速度，快速捕獲抗原和抗體。


?易于分離結(jié)合相和自由相，提高檢測精度


酶標(biāo)技術(shù)、可追溯性和試劑盒開發(fā)的難點(diǎn)


酶標(biāo)技術(shù)


?抗體/抗原表面有多個(gè)活化基團(tuán)（氨基/羧基），酶與抗體通過這些基團(tuán)連接稱為酶標(biāo)；


?酶標(biāo)簽分為大分子和大分子標(biāo)簽，大分子和小分子標(biāo)簽；


?交聯(lián)度對試劑盒的性能有重要影響。


套件的開發(fā)


?多重變量：抗體對的配對、“磁珠”和“酶標(biāo)”的稀釋度、合適的“配方”溶液、其他試劑盒成分、孵育時(shí)間


測試結(jié)果的可追溯性


?將開發(fā)的試劑盒的測試結(jié)果與對照結(jié)果相關(guān)聯(lián)


?標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性難


?不同廠家測試結(jié)果的**值可能不同


主流化學(xué)發(fā)光技術(shù)各有千秋


化學(xué)發(fā)光的基本原理：由于化學(xué)反應(yīng)（通常為氧化）。


吖啶酯、ALP和HRP發(fā)光系統(tǒng)的原理


電化學(xué)發(fā)光原理


各系統(tǒng)優(yōu)缺點(diǎn)對比


五種主流照明技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)


? 總體而言，五種主流的發(fā)光技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)。不能說技術(shù)優(yōu)劣，但從市場來看，羅氏電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的市場認(rèn)可度略良好；


? 從國外四位碩士的優(yōu)勢項(xiàng)目對比來看，羅氏（電化學(xué)）在**項(xiàng)目中占優(yōu)勢，雅培（吖啶酯）在傳染病項(xiàng)目中占優(yōu)勢，丹納赫（ALP）在甲狀腺激素項(xiàng)目中可以也可以看出，以國外各大廠商為代表的技術(shù)并不能占據(jù)**優(yōu)勢；


?相比不同類型技術(shù)的差異，國內(nèi)廠商較看重產(chǎn)品研發(fā)和質(zhì)量控制能力。


化學(xué)發(fā)光試劑的性能評價(jià)與比較：


?準(zhǔn)確度是評價(jià)試劑性能的主要指標(biāo)。所有指標(biāo)都體現(xiàn)在是否準(zhǔn)確上。但是，因?yàn)槊總€(gè)marker都有一定的特異性，客戶不能根據(jù)某個(gè)結(jié)果是否正確來評價(jià)廠家的產(chǎn)品——化學(xué)發(fā)光的結(jié)果只能作為參考，不能作為金標(biāo)準(zhǔn)；


? 根據(jù)與國外廠商的對比結(jié)果判斷國內(nèi)廠商結(jié)果的準(zhǔn)確性，線性系數(shù)R2、顯著性水平是重要指標(biāo)；


? 除了準(zhǔn)確度，試劑盒的靈敏度、重復(fù)性、線性范圍、抗干擾能力、儲(chǔ)存穩(wěn)定性、開機(jī)穩(wěn)定性、包裝體積等20余項(xiàng)參數(shù)都是試劑盒的評價(jià)指標(biāo)。




除了儀器和試劑的性能對比外，裝機(jī)容量、單機(jī)使用量、項(xiàng)目總數(shù)、項(xiàng)目發(fā)布、三級醫(yī)院使用率等數(shù)據(jù)對于評估廠商產(chǎn)品也很重要，綜合需要評估。

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