CAS:485-47-2_氨基酸檢測(cè)試劑茚三酮顯色影響因素

時(shí)間：2020-04-10作者：蘇州亞科科技股份有限公司瀏覽：163

      CΑS:485-47-2， 茚三酮，又名水合茚三酮，白色至淡黃色結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)：250 ℃，分子式: C9H6O4，分子量: 178.1415。結(jié)構(gòu)式如下，該產(chǎn)品信息均來(lái)源于蘇州亞科化學(xué)，為蘇州亞科化學(xué)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)品。
       1901年，茚三酮被成功研制出來(lái)以后主要用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，1954年，瑞典科學(xué)家Oden和Hofsten將其應(yīng)用于潛在汗液手印的顯現(xiàn)。茚三酮與汗液中的氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等發(fā)生反應(yīng)，生成藍(lán)紫色的手印紋線。
       1 茚三酮顯色反應(yīng)機(jī)理
       各種伯氨基酸的α-氨基酸和茚三酮反應(yīng)都會(huì)得到相同結(jié)構(gòu)的有色縮合物。
但這些機(jī)理并不包括反應(yīng)的全過(guò)程，不能排除還有按其他方式反應(yīng)的可能性。即使都是伯氨基的Α-氨基酸，結(jié)構(gòu)的差異、反應(yīng)機(jī)理也不完全相同。另外，有色縮合物不是單一的，反應(yīng)中間產(chǎn)物也可能通過(guò)其他形式的縮合形成各種結(jié)構(gòu)的有色物質(zhì)。例如，紫紅色的雙-1，3-二酮茚就是通過(guò)被還原的中間體1，3-茚二酮之間縮合后得到的有色產(chǎn)物:
       2 茚三酮顯色影響因素
       2.1 α-氨基酸濃度的影響
       α-氨基酸與茚三酮水溶液在所注條件下反應(yīng)擁有較低顯色濃度。隨α-氨基酸濃度變大，顯色逐漸變深。當(dāng)濃度大于一定值時(shí)，所顯顏色過(guò)深且其光密度值**出量程。當(dāng)α-氨基酸濃度在兩者之間時(shí)，顏色變化明顯且顯色較穩(wěn)定，因此我們選定此濃度范圍作為測(cè)定范圍。
       2.2 pH值對(duì)顯色反應(yīng)的影響
       通過(guò)調(diào)節(jié)pH，可以使氨基酸與茚三酮反應(yīng)顏色有明顯的變化。pH值過(guò)高、過(guò)低都不發(fā)生顯色。
       通過(guò)研究得知，中性氨基酸甘氨酸比酸性氨基酸以及堿性氨基酸賴氨酸在室溫下顯色都要快。
       在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，雖然能增強(qiáng)茚三酮或1，3-茚三酮羥基的反應(yīng)能力，但卻大大降低了參與縮合反應(yīng)的氨基、羥基等新核基團(tuán)的活性，使有色的縮合產(chǎn)物形成困難。
       在堿性條件下的顯色反應(yīng)，往往需加熱才能完成，而且在離熱后，還原型的有色縮合產(chǎn)物容易被空氣中的氧或其他氧化物所氧化引起顏色變化甚至褪色，若加SnCl2可阻止溶解氧對(duì)有色物的氧化。
       2.3 溫度及反應(yīng)時(shí)間的影響
       研究表明，溫度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)此顯色反應(yīng)的影響也很大。以谷氨酸為例，100Lg/mL的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)液在70℃進(jìn)行顯色發(fā)應(yīng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)即使加熱30 min也基本無(wú)顏色變化。當(dāng)溫度為80℃時(shí)，加熱30min以上有顏色變化，而當(dāng)溫度為90℃時(shí)，加熱15 min左右即有明顯的顏色變化，沸水加熱時(shí)顏色變化也很明顯。但考慮到蒸發(fā)的影響，所以實(shí)驗(yàn)選用90℃作為較佳反應(yīng)溫度。在顯色反應(yīng)中，反應(yīng)時(shí)間主要根據(jù)具體的顏色變化而定。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)α-氨基酸濃度在變化范圍之間，溫度稍高，加熱20min以上即可完全反應(yīng)。時(shí)間太短，反應(yīng)不完全，顏色梯度不明顯，所以較佳反應(yīng)時(shí)間在20-25 min。
       2. 4其它影響因素
       茚三酮的不同溶劑對(duì)顯色反應(yīng)也有影響。實(shí)驗(yàn)表明，茚三酮的丙酮溶液在80℃以上時(shí)顯色較好，而茚三酮的水溶液要在90℃以上時(shí)顯色才明顯。茚三酮的用量對(duì)顯色反應(yīng)的影響不大，可選擇5mL(或3mL)被測(cè)液與1mL(或0.5 mL)茚三酮溶液反應(yīng)。測(cè)定時(shí)，根據(jù)待測(cè)的α-氨基酸的溫度時(shí)間影響因素選擇溶劑。
      此外，當(dāng)被測(cè)樣品中含有其它氨基酸時(shí)也可與茚三酮發(fā)生顯色反應(yīng)，從而影響測(cè)定結(jié)果。
結(jié)束語(yǔ)
       茚三酮比色法作為一種α-氨基酸的定量檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)單、成本低的優(yōu)點(diǎn)。只要控制好實(shí)驗(yàn)條件，就能**較好的測(cè)量結(jié)果。這對(duì)于一般實(shí)驗(yàn)室的樣品分析及味精生產(chǎn)廠家的α-氨基酸產(chǎn)品測(cè)定，有較好的實(shí)用**。
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