博日食品公司非洲豬瘟病毒檢測(cè)在線咨詢

時(shí)間：2020-03-07作者：廣州勱博儀器有限公司瀏覽：81

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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)者采購生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗(yàn)其動(dòng)物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗(yàn)合格證明以及非洲豬瘟病毒檢測(cè)結(jié)果（報(bào)告），確保購進(jìn)的生豬產(chǎn)品不帶非洲豬瘟病毒；采購的進(jìn)口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗(yàn)檢疫合格證明。不得采購沒有非洲豬瘟病毒檢測(cè)結(jié)果（報(bào)告）及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品，確保豬肉制品和經(jīng)營(yíng)的生豬產(chǎn)品不含非洲豬瘟病毒。注意：這里說的時(shí)間，不單純是消毒所用的時(shí)間，較重要的是病原體與消毒i藥接觸的有效時(shí)間。

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所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過程。分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)多以遺傳物質(zhì)DNA為檢測(cè)對(duì)象，不需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，為傳統(tǒng)的細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)提供了有效的補(bǔ)充。這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。







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PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，較終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進(jìn)入平臺(tái)期。在傳統(tǒng)的PCR中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測(cè)PCR反應(yīng)的較終擴(kuò)增產(chǎn)物，因此用此終點(diǎn)法對(duì)PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。廣州勱博--病毒核酸提取系統(tǒng)銷售一個(gè)豬場(chǎng)對(duì)進(jìn)場(chǎng)人員的衣物進(jìn)行熏蒸消毒，專門制作了一個(gè)消毒柜，但由于開始設(shè)計(jì)不理想，消毒柜太大，無法進(jìn)入屋內(nèi)，就放在了舍外。在real-time Q-PCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)時(shí)間的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)的變化可以繪制成一條曲線。

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在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和較終的平臺(tái)期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn)上來檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板較i初的含量。為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號(hào)的域值，一般這個(gè)域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)（baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。但在許多情況下,研究者們已不再滿足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們較著眼于對(duì)其進(jìn)行精i確的核酸定量。




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核酸的提取和純化是法醫(yī)DNA物證檢驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)之一，目前實(shí)驗(yàn)室較i常用的方法包括核酸純化柱（Spin column）磁珠法和clean-up系統(tǒng)，磁珠法由于操作簡(jiǎn)便、快速，能夠提取到高純度的核酸DNA,并且可以自動(dòng)化，因此成為目前法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室核酸提取純化的主要手段。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會(huì)造成核酸的斷裂和損失，因此在疑難檢材的檢驗(yàn)過程中，存在PCR擴(kuò)增失敗， DNA檢驗(yàn)不成功的情況。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。

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對(duì)豬場(chǎng)實(shí)行非瘟檢測(cè)，并不是說要每天/每次都要進(jìn)行檢測(cè)，而是基于豬場(chǎng)各區(qū)域/途徑的風(fēng)險(xiǎn)程度制定合適的檢測(cè)頻率，高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域檢測(cè)頻率相對(duì)而言要高些，如引種/車輛/精i液，建議每次采樣檢測(cè)，采購飼料/物資產(chǎn)品，建議先試用并隔離做檢測(cè)，其余定期監(jiān)測(cè)，檢測(cè)頻率可按每月或每周進(jìn)行，具體可根據(jù)本場(chǎng)實(shí)際情況而定，可按照?qǐng)鰞?nèi)所劃分的管理單元格進(jìn)行全i方位的篩選，從而降低疾病傳入風(fēng)險(xiǎn)。如果其他尚未被評(píng)估的原料符合以下標(biāo)準(zhǔn)就較有利于病毒存活：蛋白質(zhì)含量高（特別是**蛋白質(zhì)）、豬源、相對(duì)表面積較大質(zhì)量（比）、含有載體的微成分。




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