凱氏定氮儀對6種不同物質(zhì)蛋白質(zhì)測定試驗

時間：2025-01-06

凱氏定氮儀是實驗室的常用設備，一般**于食品、乳制品、飼料、農(nóng)副產(chǎn)品等的蛋白質(zhì)的測定。其中蒸餾部分是定氮儀的主要功能，本文通過對這部分的改進和利用，擴展了定氮儀新的新用途，發(fā)揮一機多用，讓我們較方便、的用于檢測那些原本使用傳統(tǒng)方法來檢測的項目。如：揮發(fā)性鹽基氮、亞鹽、酒精、甲醛、揮發(fā)性酸、氨態(tài)氮以及精油、香精香料的萃取等。文章中還通過對比，匯總出凱氏法、直接蒸餾法測定各項目步驟和選用的各種試劑、指示劑。
凱氏定氮儀是通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的儀器，這種方法是由丹麥化學家凱耶達爾（Johan Kjeldahl）1883 年發(fā)明的?？梢詼y定種子、糧食、乳制品、飼料、飲料、土壤、農(nóng)副產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)以及化工、制藥行業(yè)的**氮、化妝品中的尿素含量、環(huán)境分析的總氮等等。其中很重要的一步就是蒸餾，本文正是利用定氮儀的這部分裝置，匯總出能夠利用蒸餾法檢測的項目，為凱氏定氮儀擴展了新的用途。蒸餾裝置是通過熱蒸氣對樣品蒸餾，將反應后的蒸氣進行冷凝收集，然后滴定計算。對全自動定氮儀我們只需要利用直接蒸餾功能，將餾出液通過旁路收集到錐形吸收瓶里即可。對半自動定氮儀（不含滴定功能）直接就可使用。所以我們用這種方法省去樣品消化過程，直接用于檢測揮發(fā)性鹽基氮、亞鹽、酒精含量、甲醛、揮發(fā)性酸、肥料中的氨態(tài)氮以及香精香料的萃取等。
1 揮發(fā)性鹽基總氮的測定
揮發(fā)性鹽基總氮是肉食品新鮮度的一個主要指標，動物性食品（如：肉、魚類）由于酶和細菌的作用，在過程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)（**胺和二甲胺），可引起食物中毒。
此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，在弱堿（氧化鎂）性下能與水蒸氣一起蒸餾，將氮轉(zhuǎn)化成氨，用硼酸吸收，標準酸HCL 滴定。計算出揮發(fā)性鹽基總氮量。我國食品衛(wèi)生標準中規(guī)定，當魚類揮發(fā)性鹽基氮的含量達到30mg/100g 時，即認為是變質(zhì)。另外，在飼料工業(yè)的發(fā)酵過程，由于蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生一些易揮發(fā)的含氮物質(zhì)，這時揮發(fā)性鹽基氮含量會升高。例如：豆粕的揮發(fā)性鹽基總氮在發(fā)酵前含量在 30-50mg/100g,發(fā)酵后就會升高。由于魚粉等動物蛋白，是劣質(zhì)魚粉的揮發(fā)性鹽基氮比較高，因此發(fā)酵豆粕類產(chǎn)品如果揮發(fā)性鹽基氮含量很高，可能是摻入劣質(zhì)魚粉等動物蛋白或發(fā)酵過程中出現(xiàn)所致。時用氧化鎂替代**即可，其它步驟和凱氏法相同。
2 食品、飲料中亞鹽的測定
在食品工業(yè)是果汁、啤酒、紅酒、果脯、香腸、漢堡和蔬菜中被用作防腐劑，由于對健康的嚴重危害 EC 條例規(guī)定如果濃度 >10mg/kg 或10mL/L 進行標注。檢測時總的通過酸性（60% 磷酸）蒸氣蒸餾而被釋放，然后由接收和氧化形成，用標準 NaOH 滴定（檢出限 5mL/L）。樣品前處理需經(jīng)過搖動或超聲震蕩除去二氧化碳。
3 酒中酒精含量的測定
白酒、紅酒中的酒精 , 可以直接通過蒸氣蒸餾2min,得到餾出液被收集后調(diào)整到固定體積，酒精的濃度用光密度計測量。通常濃度在 10% 的標準液回收率 >99.4%.
4 揮發(fā)性酸含量的測定
揮發(fā)性酸是厭氧消化過程的中間產(chǎn)物，將樣品用磷酸酸化后，從中蒸發(fā)出揮發(fā)性酸，再用酚酞為指示劑，用 NaOH 滴定流出液。
5 食品中游離甲醛含量的測定
吊白塊學名甲醛次氫鈉，易溶水，半透明白色物，高溫下具有很強的還原性，遇酸堿分解，有漂白作用可用作增白劑，常被非法添加到食品加工中，如腐竹、豆制品等。該物 60℃以解有害物質(zhì)，120℃分解為甲醛、、硫化氫毒氣，使人過敏、刺激腸道，10g 能使人致死。原理：樣品經(jīng)酸（磷酸）化后，次氫鈉甲醛中的甲醛被釋放出來，經(jīng)水蒸氣蒸餾，收集后的吸收液中的甲醛與乙酰及胺離子反應生成黃色物質(zhì)（3,5- 二乙?；?-1,4-二氫盧剔啶），在 435nm 有吸收，用分光光度計測定甲醛含量。檢測時好選用較大的（750mL）蒸餾瓶蒸餾樣品，防治樣品的漂浮物被蒸氣帶出，同時控制好蒸汽量不要太大。
6 肥料中氨態(tài)氮含量的測定
氨態(tài)氮是指樣品中的 NH3中的 N 元素。**肥和無機肥中的氨態(tài)氮，在堿性水蒸氣中分解為氨，硼酸吸收后用鹽酸滴定就可計算出氮的含量。實際上就是不需消化樣品的凱氏法。若在蒸餾時適當加些不含 MgO 的碳酸鹽效果較好。測定步驟和凱氏法一樣。
以上匯總了凱氏定氮儀的新應用，其具體分析方法可參考標準的內(nèi)容。通過表 1 的對比可以方便看出各步驟之間的關系。
在實際應用中我們可以根據(jù)情況對不同廠家的儀器進行改進，來符合我們的應用要求。例如：用可控硅器件改變蒸汽發(fā)生器的加熱功率和速率，來控制蒸氣量，平穩(wěn)蒸餾過程讓反應較充分；選擇合適的蒸餾管，蒸餾過程樣品的漂浮和掛壁現(xiàn)象等，這樣測得的結(jié)果就會較準確。對于像精油、香精香料的萃取也可以借鑒蒸餾裝置進行制備。
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詞條說明
水蒸汽蒸餾儀檢測過程
一、采樣準備1、受溫度影響較大，在條件允許的情況下應**選擇使用棕色吸收管。2、在注入吸收液，應保證吸收管內(nèi)外干燥。3、注入吸收液后，應保證兩端口無吸收液殘留。二、采樣中1、條件許可應**選擇具有恒溫功能的采樣儀器，并控制溫度在23至29度。2、在陽光照射下會分解，導致出現(xiàn)偏離，故采樣時，應盡量避開陽光照射的地方，如果無法避開，應做好避光措施。3、采樣時，需要時刻留意采樣儀器的流量，避免流量出現(xiàn)波
小型噴霧干燥機/冷凍干燥機
噴霧干燥是系統(tǒng)化技術應用于物料干燥的一種方法。于干燥室中將稀料經(jīng)霧化后，在與熱空氣的接觸中，水分迅速汽化，即得到干燥產(chǎn)品。該法能直接使溶液、乳濁液干燥成粉狀或顆粒狀制品，可省去蒸發(fā)、粉碎等工序。其原理為通過機械作用，將需干燥的物料，分散成很細的像霧一樣的微粒，（增大水分蒸發(fā)面積，加速干燥過程）與熱空氣接觸，在瞬間將大部分水分除去，使物料中的固體物質(zhì)干燥成粉末。噴霧干燥機是瞬間的高溫，水分迅速氣化
離心噴霧干燥機出現(xiàn)粘壁的三種情況
1、半濕物料粘壁：原因是噴出的霧滴在沒有達到表面干燥之前就已經(jīng)和器壁接觸，因而粘在壁上，粘壁的位置一般是對著霧化器噴出的霧滴運動軌跡的平面上，和霧化器的結(jié)構(gòu)，熱風在塔內(nèi)的運動狀態(tài)有關；2、低熔點物料的熱熔性粘壁：原因是物料在的溫度下達到熔點開始溶化而發(fā)粘，粘附在器壁上；3、干粉的表面粘附：干粉在有限的空間中運動總會有一些碰到器壁上，這是不能避免的，但是這樣的粘壁一般都不厚，只要通過空氣吹或者是輕輕
濃縮儀的常見問題
1.樣品濃縮儀與氮吹儀的區(qū)別? 答：樣品濃縮和氮吹儀都是用氮氣來進行吹掃，只是各廠家的命名不一樣。 2.如何能讓實驗速度快、效率高? 答：樣品濃縮儀的原理是通過提高樣品的溫度，使樣品的溶劑在無氧狀態(tài)下進行揮發(fā)，從而快捷高效的達到濃縮的目的。影響實驗速度的原因有兩個：1、加熱的溫度。2、氣體的流量及氣體溫度。我公司的樣品濃縮儀采用*的惰性氣體預加熱裝置對吹掃的氣體進行預加熱，比傳統(tǒng)方法大約節(jié)約50%