食品微生物檢測(cè)技術(shù)探討

時(shí)間：2022-01-15作者：廣州市微生物研究所集團(tuán)股份有限公司瀏覽：199

食源性病原菌已成為了當(dāng)今危害**食品衛(wèi)生安全的主要因素，因而創(chuàng)建食品微生物整套迅速檢測(cè)戰(zhàn)略方針對(duì)保證食品質(zhì)量安全、確保人們身心健康較其重要。原文中從食品類微生物檢測(cè)的前解決、增菌、分離出來(lái)和聚集及其檢測(cè)各個(gè)階段具體描述了國(guó)內(nèi)國(guó)外較新的研究成果，為創(chuàng)建一體化、即時(shí)食品類微生物檢測(cè)服務(wù)平臺(tái)給予一定的基本。

伴隨著大家生活水平的日益提升及群眾安全防范意識(shí)的不斷強(qiáng)化，食品衛(wèi)生安全做為一個(gè)關(guān)聯(lián)需求側(cè)改革的重要**性公共衛(wèi)生服務(wù)問題也備受關(guān)注。在眾多食品衛(wèi)生安全檢測(cè)新項(xiàng)目中，微生物菌種污染源是引起食源性疾病的較關(guān)鍵要素。因而，創(chuàng)建迅速、精確、靈巧的當(dāng)代微生物檢測(cè)方法在食品類監(jiān)控系統(tǒng)中至關(guān)重要。而食品類微生物檢測(cè)大概可分下列一些流程，試品前解決、增菌、分離出來(lái)和提液到檢測(cè)判斷等各個(gè)階段，文中則主要分析討論食品微生物迅速檢測(cè)的全套處理戰(zhàn)略方針。

傳統(tǒng)式微生物檢測(cè)方法包含形狀觀查、生物化學(xué)評(píng)定及血清學(xué)臨床診斷等瑣屑的實(shí)際操作，已無(wú)法達(dá)到當(dāng)代食品類微生物檢測(cè)對(duì)敏感度、非特異和實(shí)效性的規(guī)定。因而，在基因、蛋清或者新陳代謝水準(zhǔn)上，融會(huì)貫通分子生物學(xué)、物理和**化學(xué)等專業(yè)的全新技術(shù)，開發(fā)的當(dāng)代檢測(cè)方法已變成現(xiàn)如今食品類微生物檢測(cè)行業(yè)的一大網(wǎng)絡(luò)熱點(diǎn)。

生物學(xué)方法該類方法在基因水準(zhǔn)上對(duì)靶點(diǎn)微生物菌種開展檢測(cè)，特別是在適用難塑造或抗原體構(gòu)造繁瑣微生物菌種的評(píng)定及臨床診斷，主要包含ＰＣＲ、核酸分子雜交及基因集成ic等技術(shù)。此次關(guān)鍵剖析以PCR為主導(dǎo)以及有關(guān)的快檢方式。

Dna檢測(cè)

ＰＣＲ是一種身體之外酶促生成特殊ＤＮＡ精彩片段的技術(shù)，它利用以轉(zhuǎn)性、淬火和拓寬３個(gè)流程為一個(gè)周期時(shí)間的循環(huán)系統(tǒng)反映完成物質(zhì)的指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。早在１９９０年代，ＰＣＲ以其高靈敏、非特異及迅速等優(yōu)點(diǎn)已在微生物檢測(cè)中獲得廣泛運(yùn)用。近些年，伴隨著基本ＰＣＲ的持續(xù)完善，其衍化技術(shù)也被慢慢開發(fā)設(shè)計(jì)并運(yùn)用于微生物檢測(cè)。相對(duì)性于擴(kuò)增單一靶基因的基本ＰＣＲ，多種ＰＣＲ根據(jù)在同一反映系統(tǒng)中添加多對(duì)非特異引物設(shè)計(jì)來(lái)完成在同一反映管內(nèi)與此同時(shí)擴(kuò)增好幾個(gè)總體目標(biāo)基因，可用以與此同時(shí)檢測(cè)多種多樣生物或根據(jù)多基因交叉式確定來(lái)開展特殊微生物菌種評(píng)定或種下臨床診斷。如對(duì)于橙黃色金黃葡萄球菌的２３Ｓ ｒＲＮＡ、耐高溫核酸酶、血液凝結(jié)酶及其８種腸毒素的編號(hào)基因各自設(shè)計(jì)方案特異性引物設(shè)計(jì)，創(chuàng)建多種ＰＣＲ方法辨別奶制品中該菌產(chǎn)腸毒素的種類；各自以沙門菌和單增李斯特菌基因和金黃金黃葡萄球菌基因做為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)方案３對(duì)引物設(shè)計(jì)，根據(jù)提升反映管理體系，創(chuàng)建了能與此同時(shí)迅速地檢測(cè)食品類中３種病原菌的三重ＰＣＲ法。

即時(shí)瑩光定量PCR（quantitative real-time pcr，ｑＲＴ－ＰＣＲ）技術(shù)是于１９９６年發(fā)布的一種根據(jù)檢測(cè)ＰＣＲ物質(zhì)瑩光數(shù)據(jù)信號(hào)的即時(shí)積累來(lái)判定或定性分析起止模版的方法。該法全過程密閉式反映且不用ＰＣＲ后處理工藝，防止了交叉式環(huán)境污染及溴化乙錠等有毒物質(zhì)的應(yīng)用，具備非特異強(qiáng)、相對(duì)高度自動(dòng)化技術(shù)等優(yōu)勢(shì)。根據(jù)選擇非特異基因設(shè)計(jì)方案引物設(shè)計(jì)及探頭，ｑＲＴ－ＰＣＲ法近些年已在多種多樣發(fā)病病菌、黃曲霉菌、酵母菌及其乳酸菌飲料等關(guān)鍵食品微生物指標(biāo)值的定性分析和定量分析檢測(cè)中被廣泛運(yùn)用。很多學(xué)者仍在這個(gè)基礎(chǔ)上開展方法改進(jìn)，進(jìn)一步提高檢測(cè)高效率。如融合ＩＭＳ，ｑＲＴ－ＰＣＲ法不用前增菌就可以精確、迅速地檢測(cè)大腸埃希菌 O157:H7，合理減少了檢測(cè)周期時(shí)間。

雖然以上ＰＣＲ以及衍化技術(shù)具備高靈敏、迅速等優(yōu)勢(shì)，但方法執(zhí)行需要的價(jià)格昂貴實(shí)驗(yàn)儀器比較嚴(yán)重限定了其在中國(guó)食品類檢測(cè)組織的應(yīng)用推廣。

環(huán)受體等溫過程擴(kuò)增技術(shù)（loop-mediated isother ** l amplification，LAMP）是于2000年開發(fā)設(shè)計(jì)的一種不用擴(kuò)增儀、結(jié)果可根據(jù)擴(kuò)增副產(chǎn)品的渾濁度形象化判斷的新式Dna擴(kuò)增法。它根據(jù)高效率鏈換置技術(shù)，可在１ｈ內(nèi)于控溫情況下特異性擴(kuò)增ＤＮＡ達(dá)109～1010個(gè)復(fù)制。該法不用經(jīng)過繁雜變溫循環(huán)系統(tǒng)擴(kuò)增全過程，混樣后僅需一個(gè)控溫管式反應(yīng)器就可以在短期內(nèi)進(jìn)行，相較別的ＰＣＲ法具備何以類比的迅速、簡(jiǎn)單、高精度及形象化等優(yōu)勢(shì)，因此在食品類微生物檢測(cè)行業(yè)愈發(fā)遭受親睞。２０１１年，在我國(guó)也公布并實(shí)行了對(duì)于出入口食品類中１５種病原菌的ＬＡＭＰ檢測(cè)方法的出入境簽證檢驗(yàn)檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) SN/T2754.12-2011。

但LAMP檢測(cè)方法也一樣具有一定的缺點(diǎn)，例如它的恒溫標(biāo)準(zhǔn)是必須做到60-65℃，一樣必須借助一些特殊儀器設(shè)備，也就造成不可以保證當(dāng)場(chǎng)的檢測(cè)檢測(cè)，與此同時(shí)也易發(fā)生陽(yáng)性結(jié)果。


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