百螢課堂之pH熒光探針Protonex 紅600實驗方案

    一、百螢 pH熒光探針Protonex 紅600參數(shù)

     

    Ex(nm)       576           

    Em(nm)       597

    分子量       698.94

            DMSO

    存儲條件     -15℃以下保存,避光防潮

     

     

    二、百螢 pH熒光探針Protonex 紅600概述

     

    Protonex Red染料顯示出pH依賴性熒光。與大多數(shù)在較高pH下熒光較強的熒光染料不同,酸性條件可增強Protonex Red染料的熒光。隨著pH從中性降低到酸性,Protonex Red染料的熒光急劇增加。細胞外缺乏熒光消除了洗滌步驟。Protonex Red染料為監(jiān)測酸性細胞區(qū)室(如內(nèi)體和溶酶體)提供了強大的工具。Protonex Red染料在細胞外是非熒光的,但在酸性區(qū)室(如吞噬體,溶酶體和內(nèi)體)中發(fā)出明亮的紅色熒光。這種Protonex Red可以對細胞酸性隔室進行特異性檢測,降低信號可變性,提高成像或流量應(yīng)用的準(zhǔn)確度。它還可以用于多重細胞功能分析與綠色染料,如GFP,F(xiàn)luo-8,鈣黃綠素或FITC標(biāo)記的抗體。Protonex Red具有與德克薩斯紅相似的光譜特性,使得普通的德克薩斯紅過濾器可用于Protonex Red的分析。

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    1.用 Protonex Red紅 600 染色的活 HeLa 細胞的圖像。將活 HeLa 細胞接種到 96 孔板中并培養(yǎng)過夜。除去生長培養(yǎng)基后,用 Hanks 平衡鹽溶液 (HBSS) 洗滌細胞,然后用 0.6 μM Protonex Red紅 600 在 37°C 下染色 30 分鐘。染色后,再次用 HBSS 洗滌細胞,并使用帶有 TRITC 濾光片的熒光顯微鏡成像。


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              圖2.Protonex Red 紅600 的 pH 依賴性**光譜。


    三、百螢 pH熒光探針Protonex 紅600實驗方案

     

    操作步驟

    在制作Protonex 工作溶液之前,根據(jù)需要處理細胞。

     1.在DMSO中制備1至10 mM Protonex 儲備液。通過將DMSO儲備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液(HHBS)或所選緩沖液的Hanks溶液中,制備0.1至10μM的工作溶液。

     2.根據(jù)需要處理細胞,將細胞與Protonex 工作溶液在37oC下孵育15分鐘至2小時。

     3.用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。

     4.使用配有正確濾光片組的適當(dāng)熒光儀器分析細胞






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