厭氧培養(yǎng)箱的操作規(guī)程

時間：2022-09-08

厭氧培養(yǎng)箱的操作規(guī)程
（一）操作室厭氧環(huán)境形成：
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;
2. 通電源開照明燈，開溫控儀，調節(jié)所需溫度;
3. 操作室內放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示紙（封閉）;
4. 關緊取樣室內外門，并抽真空校驗;
5. 操作室內初次置換（氮氣置換）：
A. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊
B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使手套鼓起，關閉閥門1，然后扎緊袋口;
6. 操作室D二次置換（氮氣置換）重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。如此連續(xù)三次氮氣置換。
7. 操作室D四次置換（混合氣體置換）：
（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）
A. 調換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣;
B. 關掉混合氣體閥3，并打開閥5，使混合氣體經過流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右;
C. 混合氣體重復2-3次轉換，經過上述過程，基本形成厭氧環(huán)境。
8. 操作室內打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后打開美蘭指示紙觀察其變色狀況，不變色為操作室內達到厭氧環(huán)境;
9. 開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。
（二）菌種的置入和培養(yǎng)：
1. 檢查取樣室內門并關緊;
2. 打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門;
3. 取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位，關掉閥2。D二次重復操作一次。D三次操作時，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位，關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束;
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數;
5. 取樣室外門開啟、關緊，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）檢驗;
6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件：
A. 每天在操作室內打開美蘭指示紙觀察，如不正常就重新換氣;
B. 要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證室內厭氧狀態(tài)，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
C. 連續(xù)培養(yǎng)運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。
D. 操作室內溫度可任意選擇和控制。
7. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節(jié)減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。
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