細(xì)菌回復(fù)突變(Ames)試驗
用于檢測DNA損傷引起的基因突變。通過檢測受試物在測試菌株某些特殊構(gòu)建的突變體上引起突變的能力,即造成菌株從組氨酸/色氨酸依賴型向原養(yǎng)型突變,判斷受試物是否為致突變劑。
試驗需在加和不加s9代謝活化系統(tǒng)條件下同時進(jìn)行。
在培養(yǎng)細(xì)菌的瓊脂培養(yǎng)基中加入痕量的組氨酸或色氨酸,允許細(xì)菌前幾個小時生長,表現(xiàn)為背景菌苔。當(dāng)加入的組氨酸/色氨酸用盡后,只有發(fā)生了突變的細(xì)菌才可以繼續(xù)生長成為肉眼可見的回復(fù)突變菌落
Ames試驗流程
測試菌株(Ames Test System)
應(yīng)選擇至少5種菌株
TA1535
TA1537或TA97或TA97a
TA98
TA100
WP2 uvrA或WP2 uvrA(pKM101)或TA102
每種菌株在編碼組氨酸/色氨酸生物合成的操縱子上有不同的突變。
國外較多實驗室選用WP2,而國內(nèi)使用TA102較多。
測試菌株基因型和突變類型
測試菌株基因型及檢測敏感性
Rfa膜突變的存在增加了細(xì)胞膜對大分子化學(xué)物質(zhì)的通透性
uvrB-菌株的切除修復(fù)功能有缺陷,菌株無法切除DNA加合物,是的這些菌株對大量致突變劑的致突變性和細(xì)菌毒性敏感。
質(zhì)粒pKM101上含有muc+基因,參加DNA損傷誘導(dǎo)的DNA修復(fù)途徑,在給予細(xì)菌抵抗致突變劑的細(xì)菌毒性同時,提高了易突變性。含有質(zhì)粒pKM101的菌株自發(fā)回復(fù)突變菌落數(shù)較高。
TA1537、TA97和TA97a均含有胞嘧啶的重復(fù)序列,位于相應(yīng)的組氨酸靶位點內(nèi)的突變敏感部位,他們對導(dǎo)致這些移碼熱點中堿基缺失的移碼誘變劑的敏感性相似。
TA98和TA100對大部分致突變劑敏感(有數(shù)據(jù)顯示這兩個菌株檢測陽性的致突變劑占98%,因而在前期篩選試驗中可只檢測這兩個菌株。)
羥基蒽醌類化合物僅可被菌株TA1537檢測
氧化型突變劑、DNA交聯(lián)劑劑聯(lián)氨僅可被含有AT位點突變的菌株TA102、WP2urA、WP2uvrA(pKM101)檢測
菌株TA1535與TA100都在hisG46基因位點發(fā)基置換型突變,不同點僅是TA100含有pKM101質(zhì)粒,從而增加突變敏感性。但是*組通過大量數(shù)據(jù)顯示,在已知的659種致突變劑中約5%受試物僅可被TA1535檢測出,而不是TA100。
溶媒的選擇
水:水溶性化合物
二亞砜(DMSO):無水溶性化合物
丙酮
不常用溶媒:設(shè)立平行陰性對照
ICH推薦的標(biāo)準(zhǔn)遺傳毒性試驗組合
組合一
a.細(xì)菌回復(fù)突變試驗
b.體外染色體畸變試驗或體外微核試驗或體外小鼠淋巴瘤tk試驗,這三個試驗可以任選其中一個。
c.體內(nèi)微核試驗或體內(nèi)骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗;動物給藥后取外周血淋巴細(xì)胞做細(xì)胞遺傳學(xué)分析也可接受,但不常用。
組合二
b.用兩種不同組織做體內(nèi)遺傳毒性評估,通常包含體內(nèi)微核試驗和另一個體內(nèi)試驗。*二個體內(nèi)試驗通常選擇評估動物肝臟DNA鏈斷裂。
細(xì)菌回復(fù)突變試驗是與致癌物檢測相關(guān)的體外試驗
詞條
詞條說明
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