淺談雙鏈聚肌胞檢測

時間：2020-01-05作者：定州和美生物科技有限公司瀏覽：596

雙鏈聚肌胞大眾化的檢測方法一般采用熒光增強(qiáng)試驗(yàn)、紫外特征吸收光譜試驗(yàn)和磷測定法、沉降系數(shù)檢查法。這里主要談一下磷測定法檢驗(yàn)雙鏈聚肌胞含量。

  定磷法的原理是：在酸性環(huán)境中，定磷試劑中的鉬酸銨以鉬酸形式與樣品中的磷酸反應(yīng)生成磷鉬酸，當(dāng)有還原劑存在時磷鉬酸立即轉(zhuǎn)變成藍(lán)色的還原產(chǎn)物—鉬藍(lán)。鉬藍(lán)在660nm的波長處有較大吸收。

   測定供試品中核酸的總磷量，需用硫酸或過氯酸消化成無機(jī)磷后再行測定.供試品中總磷量減去無機(jī)磷量.即得核酸含磷量，出此計(jì)算核酸含量。

   對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的磷酸二氫鉀2.l95g，置500ml量瓶，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5ml置500ml量瓶中，加水至刻庋，搖勻(每1ml中含磷l0μg)。

   總磷量測定 精密量取供試品溶液1ml.置凱氏燒瓶中，加5mo/L硫酸溶液3.0ml，于l40～l60℃消化2～4小時。俟溶液呈黃褐色后，放冷，加30%過氧化氫1～2滴，繼續(xù)消化，直至溶液透明。放冷后，加水0.5ml，水浴加熱10分鐘.放冷，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水至刻度。精密量取此溶液1ml與對照品溶液0.8ml.分別加水2.0ml、定磷試劑(6mol /L鹽酸—水—2.5%鉬酸破—10%抗血酸1：2：1：1)3ml，搖勻，45℃加熱25分鐘，立即冷至室溫。照分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄ⅣA)，在660nm的波長處測定吸收度，計(jì)算。

   無機(jī)磷的測定 精密量取供試品溶液2m}.置離心管中，加沉淀劑(取鋁鉬酸銨1g，加70%過氯酸l4ml、水386ml使溶解)2.0ml，搖勻，以簡每分鐘4000轉(zhuǎn)離心15分鐘，精密量取此溶液1ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取此溶液1ml，照總磷量測定項(xiàng)下的方法，自“分別加水2ml”起，依法測定。

   核酸含磷量=總磷量一無機(jī)磷量

上面的這個就是檢測雙鏈聚肌胞含量的方法--磷測定法，這種方法本身是沒有任何問題的，可是如果拿它作為檢驗(yàn)雙鏈聚肌胞含量的一方法，我們認(rèn)為是很不妥的。磷確實(shí)是雙鏈聚肌胞的組成部分，但是磷的增加可以有很多途徑，有很多的方面可以影響到檢測，所以檢驗(yàn)雙鏈聚肌胞時要綜合考慮各種系數(shù)并做好統(tǒng)計(jì)，最后得出客觀結(jié)論。

參考資料 保定和美生物


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